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2021-08-14请教大神！荧光定量PCR cDNA加样量的问题

nanakaro
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各位战友

我实验室用的是Therimosci公司的SYBR试剂盒，说明书上要求DNA的量<500ng

但是测得CDNA浓度都在1000-2000多ng/ul

我第一次没注意500ng的问题就直接加了2ulcDNA结果CT值非常高

如果按500ng算，加的就不到1ul的量了，这样CT不是更高了嘛这样加对吗？？

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相关回复

已帮助 0人

回复：时间：2017-04-24

重新稀释了样品做了actin结果CT 值仍然很高测的RNA 的浓度不低啊 是哪里出了问题？

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回复：时间：2017-04-21

nanakaro重新稀释了样品做了actin结果CT值仍然很高测的RNA的浓度不低啊是哪里出了问题？浓度高有可能是假象，纯度的因素要考虑在内

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回复：时间：2017-04-15

我是maybe浓度高有可能是假象，纯度的因素要考虑在内谢谢maybe用Trizol提取以后需要再用试剂盒专门去除里面的DNA吗

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回复：时间：2017-04-23

你逆转录之前应该测RNA的浓度呀

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回复：时间：2017-04-22

Rose玲你逆转录之前应该测RNA的浓度呀我有测RNA浓度在1000ng/ul左右的OD值1.9

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回复：时间：2017-04-17

nanakaro我有测RNA浓度在1000ng/ul左右的OD值1.9A260／280,A260／230怎么样，逆转录按RNA多少来逆的

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回复：时间：2017-04-24

Rose玲A260／280,A260／230怎么样，逆转录按RNA多少来逆的都在正常范围的取了2ug的RNA反转录最后realtimePCR取了总量500ng加的说明书要求的量引物也在规定范围新配的结果actin跟目的基因基本都没有值出来。。。

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回复：时间：2017-04-19

nanakaro都在正常范围的取了2ug的RNA反转录最后realtimePCR取了总量500ng加的说明书要求的量引物也在规定范围新配的结果actin跟目的基因基本都没有值出来。。。2ugRNA逆的话，逆好的CDNA我们一般都加水稀释的，你可以取几ulcDNA原液稀释5倍再点，还有你要看一下逆转录体系和程序以及qPCR的程序和体系有没没错误

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回复：时间：2017-04-14

Rose玲2ugRNA逆的话，逆好的CDNA我们一般都加水稀释的，你可以取几ulcDNA原液稀释5倍再点，还有你要看一下逆转录体系和程序以及qPCR的程序和体系有没没错误谢谢你啊我都检查过了跟说明书都一样的实验室也用了很久了。。。到我做就不行了

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回复：时间：2017-04-22

Rose玲2ugRNA逆的话，逆好的CDNA我们一般都加水稀释的，你可以取几ulcDNA原液稀释5倍再点，还有你要看一下逆转录体系和程序以及qPCR的程序和体系有没没错误找到问题了谢谢战友啦

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回复：时间：2017-04-22

nanakaro找到问题了谢谢战友啦找到就好

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回复：时间：2017-04-22

请问下最后找到的是什么问题

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