定量PCR

2021-08-08定量pcr跑出了奇怪的结果,求大神指点

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结果如图。A到E都是一个样本,A123是gapdh,后面共有18种引物。f到h是另一个样本,前三个是gapdh,后面是11种引物。结果是这样的没有起跳。。样本和引物之前做都没有问题。。做这次pcr,我只是在加样完毕到上机器之间有一个多小时在外面,前几十分钟在--20度冰箱。后20分钟在冷库解冻。放冷库的时候,用橡胶手套盖住遮光。不知道是不是这里出了问题。希望能有大神指点。
另外还有几个问题。就是跑出来的结果RFU居然有负值,这是怎么回事呢?几乎在0附近,但是在溶解曲线求导前的那个曲线。RFU又是从2400+开始下降的,这是为什么呢?


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回复:时间:2021-08-12

展开引用gezhigezhi 结果如图。A到E都是一个样本,A123是gapdh,后面共有18种引物。f到h是另一个样本,前三个是gapdh,后面是11种引物。结果是这样的没有起跳。。样本和引物之前做都没有问题。。做这次pcr,我只是在加样完毕到上机器之间有一个多小时在外面,前几十分钟在--20度冰箱。后20分钟在冷库解冻。放冷库的时候,用橡胶手套盖住遮光。不知道是不是这里出了问题。希望能有大神指点。另外还有几个问题。就是跑出来的结果RFU居然有负值,这是怎么回事呢?几乎在0附近,但是在溶解曲线求导前的那个曲线。RFU又是从2400+开始下降的,这是为什么呢?......没一个扩增的。都是二聚体。

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回复:时间:2021-08-15

88675106qwe没一个扩增的。都是二聚体。请问你找到原因了吗我也遇到类似的问题

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回复:时间:2021-08-15

同问同问,我用的探针法,负值到了-2000,到底是什么原因啊,从来没遇见过负值

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回复:时间:2021-08-16

小夏子5请问你找到原因了吗我也遇到类似的问题没有找到原因,不过后来也没有再出现这种情况了。