定量PCR

SYBR Green 荧光定量PCR Mix

货号:153301
数量:大量
保存条件:-20℃
供应商:博凌科为
英文名:2xSYBRGreenqPCRMix
保质期:1年
规格:50次x50μl反应体系/200次x50μl反应体系

2xSYBRGreenqPCRMix
SYBRGreen荧光定量PCRMix
 

产品组成、储存、浓度:

目录编号包装单位包装量
15330150次x50μl反应体系1.25ml
153302200次x50μl反应体系1.25mlx4






储存:-20避光保存至少6个月,使用前充分融解混匀。短期使用可放在4,避免反复冻融。
 

制品说明:
本制品本制品是采用SYBR®GreenI嵌合荧光法进行RealTimePCR的专用试剂。已经将热启动HotMasterTaqDNA聚合酶、dNTP、特殊稳定剂、优化的反应缓冲液、BSA和SYBR®GreenI等试剂预混成一种适合RealTimePCR反应检测用2×PremixType试剂,具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。使用时只需加入模板和引物和水,便可在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对目的基因进行准确定量检测,重复性好,可信度高。本品采用全新的HotmasterTaqDNA聚合酶,该酶不同于一般Hot-start酶之处在于,一般的Hot-start酶只在第一步温度升高之前封闭酶的活性,而HotmasterTaqDNA聚合酶是利用抑制剂通过温度调节方式封闭HotmasterTaqDNA聚合酶的底物结合位点,温度低于40℃时,形成非活性的酶-抑制剂复合物,当温度升高至引物特异性的退火温度时,结合平衡向模板-特异性引物复合物形成方向移动,因此最大限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增产物产生,大大提高了荧光定量PCR反应的精确性。
 

注意事项:
1. 本制品不含内参染料ROX,客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX内参染料,用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差,配套ROX产品货号为1538RoxReferenceDye。
2. 本制品含SYBR®GreenI强光下易分解,降低敏感度,使用时避免长时间强光照射本制品。
3. 建议在冰上配制PCR反应液,再放入PCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性,减少背景。
4. 本制品含有4mMMgCl2(反应体系终浓度是2mMMg2+),可用25mMMgCl2优化Mg2+浓度。


建议PCR条件(以20μl、50μl反应体系为例,反应液配制请在冰上进行)

ComponentsVolumeVolumeFinalConcentration
2xSybrGreenqPCRMix10μl25μl
DNATemplate0.8μl2μlasrequired
ForwardPrimer(10μM)0.4μl1μl0.2μMeach
ReversePrimer(10μM)0.4μl1μl0.2μMeach
ddH2O8.4μl21μlNotapplicable
Finalvolume20μl50μl 


PCR循环(三步法)
94℃2-3min                                                            
94℃10-20sec
55-60℃10-20sec 40cycles
72℃20-30sec
DissociationStage

客户使用Bio-Rad机器的结果




Rochelightcycler480II实验结果







客户发来的博凌科为2xSYBRGreenqPCRMix和ABI 荧光定量mix平行对照图

      左博凌科为                                     右ABI





博凌科为 2xSYBRGreenqPCRMix和 Bio-Rad的荧光定量mix平行对比结果。
博凌科为的 2xSYBRGreenqPCRMix扩增效率远大于Bio-Rad的扩增效果,ct值大约早了2个循环。
有的老师同学不是很了解荧光定量PCR,所以问伯乐的扩增曲线荧光值较高,是不是更好,
这个要解释一下,荧光值高,它这个是多加了荧光染料的原因。
只要多加荧光染料sybrgreen,荧光值肯定高,
博凌科为的 2xSYBRGreenqPCRMix只要多加荧光染料,荧光值马上就能提高。但是染料多了抑制扩增效率,因此ct值会被推后。
所以,从最后效果来看,Bio-Rad的ct值晚了2个循环左右,提示博凌科为的扩增效率在该条件下,明显大于Bio-Rad的荧光定量mix。

本公司的荧光定量mix扩增效率扩增曲线明显更高,融链曲线也非常锐利。



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温馨提示:不可用于临床治疗。

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