组织标本

聚丙烯酰胺凝胶中DNA的放射自显影检测

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实验方法原理丙烯酰胺凝胶电泳分离的放射性DNA条带可用放射自显影的方法检测。含有放射性DNA的聚丙烯酰胺分析凝胶,在放射自显影前通常要固定和干燥。然而,若要从凝胶中回收放射性DNA条带,则不应固定和干燥。
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
一、材料

1.缓冲液和溶液

乙酸

2.凝胶

聚丙烯酰胺凝胶

3.专用设备

市售凝胶干燥机(可选或不选)

塑料筛(筛目大小为1cm,园艺和五金商店有售)(可选或不选)

放射性墨水或化学发光标准参照物

Whatman3MM滤纸

二、方法

1.将凝胶及其附着的玻璃板于7%乙酸中浸5min。小心地从固定液中拿起玻璃板以取出凝胶。

2.去离子水短暂漂洗凝胶,用一叠Kimwipes纸蘸去凝胶表面多余的液体。

3.(可做或不做)将凝胶放在Whatman3MM纸上,用市售凝胶干燥机干燥。

4.将凝胶及支撑的玻璃板包在SaranWrap膜中,用梳子宽的一端或折叠的Kimwipe纸除去SaranWrap膜中的气泡或皱褶。

5.将放射性墨水或化学发光标准参照物标记的黏性小标签贴于SaranWmp膜表面,以便对准凝胶与胶片的位置。用透明胶带覆盖放射性墨水标签,以免污染胶片盒和增感屏。

6.将凝胶倒置,按以下步骤对X射线片(如KodakXAR-5或同类产品)曝光:

(1)在暗室里,用胶带将密封的凝胶与裁成玻璃板大小的一张X射线片粘在一起。

(2)用不透光的铝箔将凝胶与胶片包好。

(3)于室温或-70℃曝光合适的时间,增感屏使用与否均可。

(4)按制造商的建议显影、定影和干燥X射线胶片。