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还原糖含量测定一用斐林试剂热滴定法

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实验方法原理斐林试剂由甲、乙两种溶液组成。甲液含有硫酸铜和次甲基蓝;乙液含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。混合时,硫酸铜与氢氧化钠起作用生成蓝色氢氧化铜沉淀,而酒石酸钾钠在碱性溶液中使沉淀的氢氧化铜溶解而成络合物。络合物与还原糖共热时,两价铜被还原为一价氧化亚铜(红色沉淀),再与试剂中亚铁氰化钾反应生成可溶性化合物而不复析出。斐林试剂中两价铜被还原完毕后才能使次甲基蓝还原为无色,故次甲基蓝在此作为指示剂。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
溶液配制:
1.斐林试剂甲液:称取15g硫酸铜,0.05g次甲基蓝溶于蒸馏水中并定容至1L。 

2.斐林试剂乙液:50g酒石酸钾钠,54g氢氧化钠,4g亚铁氰化钾溶于蒸馏水中并定容至1L。

3.6mol/L盐酸:量取浓盐酸500ml加蒸馏水至1L。

4.6mol/L氢氧化钠:称取氢氧化钠240g溶于蒸馏水至1L。

5.标准葡萄糖溶液(0.1%):精确称取葡萄糖(在105℃干燥至恒重)1g溶于蒸馏水中并定容至1L。


操作步骤:

1.空白管测定:取斐林试剂甲、乙液各5ml,置250ml三角瓶中,由滴定管加适量0.1%标准葡萄糖溶液,在电炉上加热至沸,然后以4~5s一滴的速度继续自滴定管中加入标准葡萄糖溶液,滴定至蓝色消失,记下总共所消耗的葡萄糖体积(A)。

2.样品测定:6~7ml待测样品溶液(含糖量在3~4mg/6~7ml),加斐林试剂甲、乙液各5ml,置250ml三角烧瓶中,同空白测定一样操作,记下所耗标准葡萄糖体积(B)。

3.计算: