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细菌基础培养基制备实验一固体培养基
实验方法原理 | 培养基是人工合成的一种混合营养料,用于分离培养细菌。常用的有基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基等。 | ||||
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试剂、试剂盒 | 牛肉膏蛋白胨氯化钠蒸馏水琼脂NaOH酚红指示剂 仪器、耗材 | pH试纸三角烧瓶量筒天平吸管
实验步骤 | 一、普通琼脂培养基 于pH7.6-7.8的肉膏汤中加入2%-3%琼脂,加热溶化(必要时用脱脂棉过滤后再补足水分)适量分装于适当的试管或三角烧瓶中,塞上硅胶塞并用牛皮纸包扎,置高压灭菌器内103.4kpa、121.3℃、20分钟灭菌。 1. 琼脂斜面:分装于试管中的琼脂培养基,由高压灭菌器内取出后,趁热将试管斜置冷凝后即成琼脂斜面(或称普通斜面)。 2. 琼脂平板:分装于烧瓶中的琼脂培养基,由灭菌器内取出后,待冷却至50-60℃时,以无菌操作倾入无菌平皿内(直径9cm的平皿,约需13-15ml琼脂培养基),冷凝后即成琼脂平板(或称普通平板)。 二、血液琼脂培养基 有些细菌营养要求较高,在普通琼脂培养基生长不良,可用血液琼脂培养基进行培养。将已灭菌的琼脂培养基于50℃时,以无菌操作加入无菌的5%-10%脱纤维羊血(或兔血),摇匀后分装于无菌试管,斜置冷凝后即成血液琼脂斜面;分装于无菌平皿,摇匀后冷凝即成血液琼脂平板(简称血平板)。将以上固体培养基(平板应底朝上)放入37℃温箱24小时培养,如无菌生长,放凉后即可保存冰箱备用。平板可用于细菌分离培养,斜面可用于增菌和保存菌种等。 三、半固体培养基 于pH7.6的肉膏汤种加入0.3%-0.5%琼脂,加热溶化,脱脂棉过滤后补足水分,适量分装于试管内,经103.4kpa、121.3℃、20分钟高压灭菌,取出直立,待琼脂凝固后,即成为半固体培养基,37℃温箱培养24小时无菌生长,即可应用。常用于观察细菌动力和保存菌种。
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