有丝分裂中细胞的同步化

1.37℃，用合适的含有FCS，抗生素和其他必要成分的培养基培养细胞。

2.收集有丝分裂细胞前10~16小时在培养基中以0.06μg/ml的浓度加入秋水仙胺。

收获细胞并在聚胺缓冲液中裂解

3.收获细胞。

对于悬浮培养细胞（500ml培养基），室温1500g离心5分钟收获细胞。在室温用聚胺缓冲液清洗三次所得到的沉淀，1500g离心5分钟收集细胞。

聚胺缓冲液：

15mmol/LTris-HCl(pH7.4)

0.2mmol/L精胺

0.5mmol/L精咪

2mmol/LEDTA

80mmoI/LKCl

0.1mmol/LPMSF（临用前从用100%乙醇制备的1mmol/L的贮存液中加入）

4.细胞用20ml冰冷的含0.1％毛地黄皂苷的聚胺缓冲液重悬浮。

5.用Dounce匀浆器和B研棒进行10次温和匀浆裂解细胞（过于剧烈的匀浆会导致染色体明显损伤）。另外也可以将悬液温和地吸到一塑料注射器中，然后推动便其通过25号针头（应避免溶液起泡沫）。

6.细胞裂解后，取出少量裂解液观察染色质释放情况。在有一滴用来进行DNA染色的2μg/mlHoechst33258的分离缓冲液溶液的载玻片上，滴一滴裂解悬液。用荧光显微镜观察染色质。

7.用JS-13(Beckman)，HB-4(Sorvall)，2150(Herace)或相似的悬桶式转头在250g离心1分钟沉淀裂解液去除碎片。

8.取出含有染色体的上清，3000g离心15分钟。

9.将含有染色体的沉淀重悬浮于5~10ml的聚胺缓冲液中。制备的染色体可以在4℃保存。保存2~4个星期后观察不到形态的变化；但对于特殊目的的研究（例如酶活性，不稳定蛋白），得到的染色体应立即使用。