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冻存细胞的复苏
蚂蚁淘
/发布时间:1533244693 /浏览量:95
| 实验方法原理 | 冻存细胞应在流水中快速融化并加入生长培养液。实验者应配戴护目镜和手套，因为曾浸没在液氮中的冻存管中可能漏人液氮，而当融化冻存液时冻存管中的气体温度上升可导致爆炸。 |
|---|---|
| 实验步骤 | 1)调整水龙头温度为40°C，在龙头下放置一广口烧杯。 2)从液氮中取出冻存细胞的冻存管。 3)将冻存管置于40°C流水中直至完全融化，一旦冰块消失即将冻存管从水浴中取出。 该步骤的目的是尽可能快地融化细胞，但不允许细胞温度升到37°C以上而且一旦其融化细胞便不应再保存在冻存液中。 4)用70%乙醇擦洗冻存管外部以降低污染机会。 5)吸取冻存管内容物于T-25细胞培养瓶或培养皿中，缓慢加人4ml生长培养液，并混匀。 6)37°C孵育细胞，在24小时内更换培养液以滋养细胞。 |
| 注意事项 | 注意事项 •某些类型细胞呈现较好的复苏效果，如果缓慢加入培养液于冻存液中以使冻存液被去除，然后细胞离心后重悬于新鲜培养液中。 •冻存记录：保存冻存细胞的精确记录是很重要的。需建立细胞生长史、名称、传代次数、冻存日期、复苏次数、生长培养液和在冻存器中的位置都是应记录的项目。 •冻存液：应用补充10%~20%FBS的生长培养液和10%甘油或DMSO。大多数悬浮细胞釆用DMSO。最佳冻存液配方在比较FBS浓度（10%~20%)，DMSO(5%~20%)或甘油（10%~15%)浓度后决定。在低温状态保存数天后进行复苏效率的比较。 小心：甘油；DMSO |
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