临床研究

金属硫蛋白的测定实验一镉血红素法

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实验方法原理MT是一种低分子量的蛋白质,含有大量的半胱氨酸,并对金属有较高的亲和性。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤

一、实验步骤

1. 组织按1:4(w/v)加入0.25mol/l蔗糖溶液,制备匀浆,18000g离心20min(4℃)。

2. 取上清液0.5ml,加入1.9ml0.03mol/lTris-HCl缓冲液(pH8.0)。

3. 再加入1mlCdCl2(10ppm)混匀,室温孵育5min。

4. 加入2%牛血红蛋白0.2ml,沸水浴1min,室温离心1000g,5min。

5. 反复加入牛血红蛋白,加热、离心3次。

6. 在原子吸收分光光度计,用石墨法测定上清液Cd含量。

7. 组织MT含量按6g原子Cd结合可分子MT计算。

8. 按Bradford法测定上清液中的蛋白质含量。

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