1. InamicrocentrifugetubeprepareasolutionoflinearDNA(25-50ng)indeionizedwaterorTEbuffer(10-35µl).
2. Add:
   • 10Xligationbuffer5µl,
   • 50%PEG4000solution(forbluntendsonly)5µl,
   • deionizedwaterto50µl,
   • T4DNALigase5u.Vortexthetubeandspindowninamicrocentrifugefor3-5seconds.
3. Incubatethemixturefor1hourat22°C.
4. InactivateT4DNALigasebyheatingreactionmixtureat65°Cfor10minutes.
5. Resultingreactionmixturecanbeuseddirectlyfortransformation.

References

1. Sambrook,J.,Russell,D.W.,MolecularCloning:ALaboratoryManual,thethirdedition,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NewYork,2001.
2. CurrentProtocolsinMolecularBIOLOGy,vol.1(Ausubel,F.M.,etal.,ed.),JohnWiley&Sons,Inc.,Brooklyn,NewYork,1994-2001.

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