1.倒平板

将肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏I号琼脂培养基、马丁氏琼脂培养基加热溶化，待冷至55～60℃时，高氏I号琼脂培养基中加入10％酚数滴，马丁氏培养中加入链霉素溶液（终浓度为30μg/ml），混均匀后分别倒平板，每种培养基倒三皿。

倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拔出，试管或瓶口保持对着火焰i然后用右手手撑边缘或小指与无名指夹住管（瓶）塞（也可将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞则不必夹在手中）。左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml（图VII-1），加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。

2.制备土壤稀释液

称取土样10g，放入盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇约20min，使土样与水充分混合，将细胞分散。用一支1ml无菌吸管从中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml（无菌操作见图VII-2）加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6不同稀释度的土壤溶液，如图VII-3，A所示.

3.涂布

将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上10^-4、10^-5和10^-6三种稀释度，然后用无菌吸管分别由10^-4、10^-5和10^-6三管室温下静置5～10min，使菌液吸附进培养基。

平板涂布方法：将0.1ml菌悬液小心地济在平板培养基表面中央位置（0.1ml的菌液要全部滴在培养基上，若吸移管尖端有剩余的，需将吸移管在培养基表面上轻轻地按一下便可）。右手拿无菌涂棒平放在平板培养基表面上，将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动，使之分布均匀玻璃涂棒（见图VII-4），然后改变方向沿另一垂直线来回推动，平板内边缘处可改变方向用涂棒再涂布几次。

4.培养

将高氏I号培养基平板和马丁氏培养基平板倒董于28℃温室中培养3～5d，肉膏蛋白胨平板倒置于37℃温室中培养2～3d。

5.挑菌落将培养后长出的单个菌落分别挑取少许细胞接种到上述三种培养基的斜面上（图VII-3，C），分别置28℃和37℃温室培养，待菌苔长出后，检査其特征是否一致，同时将细胞涂片染色后用显微镜检査是否为单一的微生物，若发现有杂菌，需再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。