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回复:时间:2021-07-25
酚-氯仿方法是提取核酸的经典方法,主要原理是利用核酸、蛋白等杂质在水相和有机相中溶解度不同而重新分配。试剂盒原理是在特定溶液环境下(高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质(一般是硅胶膜)上,洗涤去除杂质后,再改变溶液环境使DNA溶解到纯水或TE中。酚氯仿方法经典、便宜,用的都是实验室常用试剂,提纯效率和纯度都很高,但缺点是费时费力,苯酚和氯仿还有一定毒性,我见过的实验室很少有用这种方法的。试剂盒严格来说也分好多种,经典的是离心柱的,就是把硅胶膜固定在离心管中,类似于超滤膜,用离心力或者负压让液体通过硅胶膜,核酸就留在膜上。在经过洗涤、洗脱的步骤得到核酸。这种方法的优点是操作简单、时间短,现在也能达到很高的质量,价格也不贵。缺点是不易放大,需要多次离心。试剂盒基本步骤是先使样本裂解,在特定溶液中通过离心流过硅胶膜,再经过几次洗涤,最后加上洗脱液,离心后核酸就溶解到洗脱液中。具体的你可以根据你自己的需要到网上查一下说明书,现在做试剂盒公司的很多,步骤大同小异。试剂盒也不是一定很便宜,对一些难度高(病毒核酸、法医样本核酸)或者要求高(去内毒素)的用途也比较贵。还有一种磁珠法提取,不需要离心,易于放大,可以用于自动化操作。这种高端一点的产品基本上是外国公司垄断的。
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回复:时间:2021-07-25
酚-氯仿方法是提取核酸的经典方法,主要原理是利用核酸、蛋白等杂质在水相和有机相中溶解度不同而重新分配。试剂盒原理是在特定溶液环境下(高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质(一般是硅胶膜)上,洗涤去除杂质后,再改变溶液环境使DNA溶解到纯水或TE中。酚氯仿方法经典、便宜,用的都是实验室常用试剂,提纯效率和纯度都很高,但缺点是费时费力,苯酚和氯仿还有一定毒性,我见过的实验室很少有用这种方法的。试剂盒严格来说也分好多种,经典的是离心柱的,就是把硅胶膜固定在离心管中,类似于超滤膜,用离心力或者负压让液体通过硅胶膜,核酸就留在膜上。在经过洗涤、洗脱的步骤得到核酸。这种方法的优点是操作简单、时间短,现在也能达到很高的质量,价格也不贵。缺点是不易放大,需要多次离心。试剂盒基本步骤是先使样本裂解,在特定溶液中通过离心流过硅胶膜,再经过几次洗涤,最后加上洗脱液,离心后核酸就溶解到洗脱液中。具体的你可以根据你自己的需要到网上查一下说明书,现在做试剂盒公司的很多,步骤大同小异。试剂盒也不是一定很便宜,对一些难度高(病毒核酸、法医样本核酸)或者要求高(去内毒素)的用途也比较贵。还有一种磁珠法提取,不需要离心,易于放大,可以用于自动化操作。这种高端一点的产品基本上是外国公司垄断的。国内也有一批人在做这种磁珠,希望能打破这种垄断。上海交大的古宏晨教授和他创立的上海奥润微纳就是这批人的代表。(有点打广告的嫌疑,看在码了这么多字的份上也可以理解哈)核酸提取试剂盒的学问很多,有兴趣的话还可以再交流。:)向左转|向右转
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