- 什么是DNA沉淀(DNA Precipitation)? ...
- 蛋白质交联作用的事例_完美作业网_www.wanmeila....
- 类风湿相关核抗原(RANA)抗体结果分析_正常值_临床意义寻...
- 赛多利斯百得移液器和吸头2018最新报价全系列 上海仪器网
- 超声波骨密度仪和射线骨密度仪对比_happy林526
- Cell Press Journal电子期刊全文数据库图书...
- 【求助】做荧光定量PCR提RNA用试剂盒还是普通方法好 核...
- 学霸们都是先搞清题目,才开始答题|《思维力:高效的系统思维》...
- Isolation Of Cosmid, Plasmid a...
- 富士胶片和光(广州)贸易有限公司
- Tasty Planet Lite 安卓下载 | 好玩安卓...
- 您好,刚才做实验,开了通风橱,.._有问必答_
- [07-26][求助]大家能推荐好一点的DNA提取试剂盒吗? 经验共享 分析测试...
- [03-14]哪家公司的DNA提取试剂盒质量比较好?
- [07-20]DNA提取纯化操作手册
- [10-03]细菌DNA提取方法
- [10-03]国内能买到的快速高效提取人DNA试剂盒有哪些? 夏忆 的回答
- [07-28]求助动物组织的DNA提取试剂盒 00问答网
- [07-22]求DNA提取试剂盒与苯酚氯仿提取DNA法的异同?_生物_科学_天涯...
- [10-02]DNA分离纯化学术百科知网空间
- [07-29]不同DNA提取试剂盒提取作物种子基因组DNA效果的比较.doc_
外周血DNA提取技术
方法一:1.标本预处理:将1mlEDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入5ml离心管中,加入1ml磷酸缓冲盐溶液(PBS),混匀,3500g离心15min,倾去含裂解红细胞上清。重复一次。用0.7mlDNA提取液混悬白细胞沉淀,37℃水浴温育1h。2.消化:上述DNA提取液混悬白细胞,37℃水浴温育1h后,加入1mg/ml蛋白酶K0.2ml,至终浓度为100-200ug/ml,上下转动混匀,液体变粘稠。50℃水浴保温3h,裂解细胞,消化蛋白。保温过程中,应不时上下转动几次,混匀反应液。3.酚抽提纯化DNA:上述反应液冷却至室温后,加入等体积的饱和酚溶液,温和地上下转动离心管5-10min,直至水相与酚相混匀成乳状液。5000g离心15min,用大口吸管小心吸取上层粘稠水相,移至另一离心管中。重复酚抽提一次。加等体积的氯仿﹕异戊醇(24﹕1),上下转动混匀,5000g离心15min,用大口吸管小心吸取上层粘稠水相,移至另一离心管中。重复一次。4.加入1/5体积的3mol/LNaAc及2倍体积的预冷的无水乙醇,室温下慢慢摇动离心管,即有乳白色云絮状DNA出现。用玻璃棒小心挑取云絮状的DNA,转入另一1.5ml离心管中,加70%乙醇0.2ml,5000g离心5min洗涤DNA,弃上清,去除残留的盐。重复一次。室温挥发残留的乙醇,但不要让DNA完全干燥。加TE液20ul溶解DNA,置于摇床平台缓慢摇动,DNA完全溶解通常需12-24小时。5.DNA的浓度测定及纯度判定:取DNA溶液用TE液做适量稀释,以TE液作空白对照,在紫外分光光度计上读取A260和A280的光密度值。按下面公式计算浓度:DNA浓度(ug/ul)=A260*50*稀释倍数/1000DNA纯度的判定:A260/A280比值应介于1.7-2.0之间。 方法二:分别采集外周静脉血5ml,2%乙二胺四乙酸二钠(EDTA)抗凝待用(要求采血至分离白细胞之间隔时间在室温下放置不超过2h,4℃放置不超过5h,以防白细胞自溶)。采用NaI提取法提取外周血白细胞基因组。(1)取外周抗凝血(全血)100ul于Ep管中,12000rpm离心12min(2)弃上清,加双蒸水200ul溶解,摇匀20s(3)混匀后加6MNaI溶液200ul,摇匀20s(4)加氯仿/异戊醇(24:1)400ul,即加即摇,摇匀20s,12000rpm离心12min。(5)取上层液350ul,加入另一新Ep管中,加0.6倍体积异丙醇,摇匀20s,室温放置15min,静置后的反应体系15000rpm离心12min,使沉淀紧贴Ep管壁。(6)弃异丙醇,加70%乙醇1ml(不振动),15000rpm离心12min。(7)弃乙醇,敞开Ep管盖,烘干(37℃恒温箱)后,加1xTE溶液30ul,溶解DNA>12h以上,制成的DNA液-20℃冰箱保存备用。
================ 蚂蚁淘在线 ================
免责声明:本文仅代表作者个人观点,与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实,对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺,请读者仅作参考,并请自行核实相关内容
版权声明:未经蚂蚁淘在线授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的,应该授权范围内使用,并注明“来源:蚂蚁淘在线”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。