实验材料蛋白样品仪器、耗材质谱仪实验步骤反相 HPLC 分段收集磷酸肽重现性好，简单，且不需要特殊装备。在 RP-HPLC 中，磷酸肽根据其疏水性被分离。分离后收集的组分经 Cerenkov计数检测。对 Cerenkov计数和时间作图，显示具放射性活性的组分的计数。纯化的磷酸肽用 MS 分析；可用不同的 MS 和 MS/MS 方法。相对于 2D-PP, RP-HPLC 的缺点是高亲水性的磷酸肽不会在柱上停留，而是直接流过柱子。相反，高疏水性的肽直到最高梯度才会被洗脱，甚至不会被洗脱。因此，有可能样品中有些磷酸肽不会被检测到。总体上说， RP-HPLC 的分辨力不如 2D-PP 作图法的分辨力好。需要注意的另一点是磷酸肽会附着在金属表面。因此，如果用标准的金属注射器，会发生明显的样品丢失。使用 RP-HPLC 分析磷酸肽的一个很大的吸引力是 RP-HPLC 系统可以与ESI 质谱方便地在线连接。使用在线连接到 HPLC 系统的质谱......阅读全文

磁珠法分离纯化DNA原理及其步骤

磁珠法纯化DNA原理 磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠，这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团，能同核酸发生吸附反应。硅磁(Magnetic Silica Particle)就是指磁珠微珠表面包裹一层硅材料，来吸附核

蛋白质提取与制备

1蛋白质提取与制备蛋白质提取与制备蛋白质种类很多，性质上的差异很大，既或是同类蛋白质，因选用材料不同，使用方法差别也很大，且又处于不同的体系中，因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的，大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中，少数与脂类结合

第三届全国生物质谱学术交流会隆重召开 Prof. Hookeun Lee, Gachon University of Medicine and Science, Korea Title: Mass Spectrometric Quantitative Proteomic Analysis: Roles of Microcapi

不同分子量蛋白质的分离——凝胶管柱层析法

实验原理凝胶层析又称凝胶过滤，是一种按分子量大小分离物质的层析方法。该方法是把样品加到充满着凝胶颗粒的层析柱中，然后用缓冲液洗脱。大分子不能进入凝胶颗粒中的静止相中，只留在凝胶颗粒之间的流动相中，因此以较快的速度首先流出层析柱，而小分子则能自由出入凝胶颗粒中，并很快在流动相和静止相之间形成动态平衡，

磷酸化蛋白鉴定实验

实验材料测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IMAC) 富集磷酸肽（见 24. 3. 2 )；用串联质谱对磷酸

磷酸化蛋白鉴定实验

实验材料 测序级膜蛋白酶试剂、试剂盒 二硫苏糖醇碘代乙酰胺乙酸溶液甲酸乙酰氯仪器、耗材 螯合琼脂糖凝胶层析介质实验步骤 这里所述的方法概括为下列几个步骤：胰蛋白酶水解消化膜和可溶性组分中的蛋白质（见 24. 3.1 )；固相金属螯合亲和层析（IMAC) 富集磷酸肽（见 24. 3. 2 )；用串

快速了解maxan-Gilbert化学修饰法

实验方法原理用化学试剂 处理具有末端放射性标记的DNA片段 ，造成碱基的特异性切割并产生一组具有不同长度的DNA链降解产物，经凝胶电泳分离和放射自显影后，可直接读出待测DNA片段的核苷酸序列。实验材料DNA试剂、试剂盒蒸馏水仪器、耗材电泳仪实验步骤一、取待测DNA片段，既可以是单链也可以是双链。&n

DNA测序——Maxam-Gilbert化学修饰法

实验方法原理用化学试剂 处理具有末端放射性标记的DNA片段 ，造成碱基的特异性切割并产生一组具有不同长度的DNA链降解产物，经凝胶电泳分离和放射自显影后，可直接读出待测DNA片段的核苷酸序列。实验材料DNA试剂、试剂盒蒸馏水仪器、耗材电泳仪实验步骤一、取待测DNA片段，既可以是单链也可以是双链。&n

天津市第22届色谱技术交流会在津召开 共享色谱新技术

分析测试百科网讯2016 年 8 月 30 日两年一届的天津市色谱学术会议在天津市南开大学召开。本届会议由天津市色谱研究会主办，并得到了岛津公司的大力支持。本次会议以前沿色谱、质谱新方法、新技术及其应用的最新进展为主题，100余色谱、质谱专家、学者充分交流了近年来色谱质谱及其相关领域的最新研究成

微生物学检验基本技术(1)

第一节 微生物形态学检查 细菌形态学检查是细菌检验的重要方法之一，它是细菌分类和鉴定的基础，可根据其形态、结构和染色反应性等，为进一步鉴定提供参考依据。 一、显微镜检查 由于细菌个体微小，肉眼不能看到，必须借助显微镜的放大才能看到。一般形态和结构可用光学显微镜观察，其内部的超微结构则需用电

血红蛋白(Hemoglobin；Hb)凝胶柱层析

一、实验目的1.了解凝胶柱层析的原理及应用；2.掌握凝胶柱层析的基本操作技术，为进一步掌握离子交换柱层析、亲和层析及吸附层析等其它分离方法打下良好的基础。二、实验原理凝胶层析：原理与应用凝胶层析又称凝凝胶过滤，是一种按分子量大小分离物质的层析方法。该方法是把样品加到充满着凝胶颗粒的层析柱中，然后用缓

微生物学检验基本技术(1)

随着现代医学及相关科学技术的发展，各学科相互交叉和渗透，医学微生物学检验技术已深入到细胞、分子和基因水平，许多新技术、新方法已在临床微生物实验室得到广泛应用。医学微生物学实验室的基本任务之一是利用微生物学检验技术，准确、快速检验和鉴定临床标本中的微生物，并对引起感染的微生物进行耐药性监测，为临床对感

脱落酸（ABA）放射免疫测定

原理 ABA放射免疫测定(radioimmunoassay, RIA)是一种分子相同的标记ABA(*Ag)和非标记ABA(Ag)与另一种浓度有限的专一性抗ABA抗体(Ab)进行的竞争性抑制反应： 当反应体系中*Ag和Ab量保持恒定，并且*Ag量

长春应化所设计合成新型稀土基磁性亲和材料 蛋白质的可逆磷酸化修饰是生物体内普遍存在的信息转导调节方式，几乎参与生命活动的所有过程，在细胞的增殖、发育和分化，细胞信号转导、转录和翻译，细胞的周期调控、蛋白降解和新陈代谢，细胞生存、细胞凋亡和肿瘤发生等方面发挥着重要的作用。目前已知许多人类疾病的发生都与异常的蛋白质磷酸化修饰

毛细管电泳与MALDI-TOF/MS测定血清转甲状腺素蛋白化学修饰

毛细管电泳与MALDI-TOF/MS联用测定血清转甲状腺素蛋白的化学修饰引言转甲状腺素蛋白(transthyretin, TTR)由127个氨基酸组成, 相对分子质量为13 758 000。生理条件下血浆中的TTR与甲状腺素、视黄醇蛋白结合以4聚体形式存在于血液中, 参与甲状腺素的运输[1]。人血清

一文了解溶菌酶的制备鉴定

溶菌酶,全称为1,4-β-N-溶菌酶,又称粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶,属于α-乳白蛋白家族。人们对溶菌酶的研究始于上世纪初,英国细菌学家Fleming发现人的唾液、眼泪中存在有溶解细菌细胞壁的酶,因其具有溶菌作用,故命名为溶菌酶；此后人们在微生物、植物、无脊椎动物和高等动物中也发现了溶菌酶的存在

溶菌酶的制备、纯化和鉴定

实验概要制备、纯化和鉴定溶菌酶实验原理溶菌酶,全称为1,4-β-N-溶菌酶,又称粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶,属于α-乳白蛋白家族。人们对溶菌酶的研究始于上世纪初,英国细菌学家Fleming发现人的唾液、眼泪中存在有溶解细菌细胞壁的酶,因其具有溶菌作用,故命名为溶菌酶；此后人们在微生物、植物、无脊椎动

酚类产品组成的气相色谱测定方法

本标准适用于焦化产品的三混甲酚、间对甲酚中苯酚、邻甲酚、间甲酚和对甲酚等组分的测定。 本方法使用PBOB液晶作固定液，少量磷酸为减尾剂，白色405硅烷化载体配制的固定相，试样不需转化处理，直接进样，分离、分析甲酚异构件等组分。测量各组分的峰面积，按面积归一化法计算各组分的百分含量。 一、仪器和

高效液相色谱测定六味地黄丸的含量

六味地黄丸处方为：熟地黄160g，山茱萸（制）80g，牡丹皮60g，山药80g，茯苓60g，泽泻60g。2005版《中国药典》采用高效液相色谱法测定了山茱萸中马钱苷和牡丹皮中丹皮酚的含量……摘要：六味地黄丸处方为：熟地黄160g，山茱萸（制）80g，牡丹皮60g，山药80g，茯苓60g，泽泻60g。

关于TP——总磷的详解！

磷是一种活泼元素，在自然界中不以游离状态存在，而是以含磷有机物、无机磷化合物及还原态PH3这三种状态存在。污水中含磷化合物可分为有机磷与无机磷两类。 无机磷几乎都以各种磷酸盐形式存在，包括正磷酸盐、偏磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐，以及聚合磷酸盐如焦磷酸盐、三磷酸盐等。有机磷大多是有机磷农药，如

手性色谱柱知识介绍

手性色谱柱（ChiralHPLCColumns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（ChiralStationaryPhases）。通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。要实现手性识

琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖是从琼脂中提取出来的，是由D-半乳糖和3、6-脱水-L-半乳糖结合的链状多糖，含硫酸根比琼脂少，因而分离效果明显提高。琼脂糖电泳具有以下优点：①琼脂糖含液体量大，可达98％～99％，近似自由电泳，但样品的扩散度比自由电泳小，对蛋白质的吸附极微；⑦琼脂糖作为支持体有分辨率高、重复性好等优点；③电

HPLC同时测定饲料中双乙酸钠/丙酸钙/山梨酸钾/苯甲酸钠

饲料添加剂是指在饲料生产加工、使用过程中添加的少量或微量物质,在饲料中用量很少但作用显著。防腐剂由于具有抑制和杀灭微生物增殖的作用而被广泛应用于食品工业中。目前我国批准在食品中使用的防腐剂有十几种,其中双乙酸钠、丙酸钙、山梨酸钾和苯丙酸钠在饲料中应用较普遍,其结构式见图1。双乙酸钠(sodium

色谱柱相关的100个问题

色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。多为金属或玻璃制作。有直管形、盘管形、U形管等形状。液相色谱通常均采用填充柱。色谱柱的分离效果取决于所选择的固定相，以及色谱柱的制备和操作条件。 1、网上对柱子是否可以反冲一直有争论，那什么样的柱子可以反冲，什么不可以。反冲后是正者用，还是反着用。具体到各型号

抗原的制备方法-2

表2－1 室温下由S1提高到S2时每升加固体硫酸铵的克数 0.10 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.65 0.70 0.75 0.80 0.85 0.90 0.95 1.000 55 113 114 175 209 242

手性色谱柱知识（二）

环糊精型：环糊精是通过Bacillus Macerans 淀粉酶或环糊精糖基转移酶水解淀粉得到的环型低聚糖。通过控制环糊精转移酶的水解反应条件可得到不同尺寸的环糊精。市售的环糊精主要是α、β、γ三种类型，分别含6、7、8个吡喃葡萄糖单元。环糊精分子成锥筒型，构成一个洞穴，洞穴的孔径由构成环糊精的

碱性磷酸酶的分离提取及比活力的测定

、实验原理 碱性磷酸酶（alkalinephosphatase EC3.1.3.1简称为ALPase）广泛存于微生物界和动物界。ALPase能催化几乎所有的磷酸单酯的水解反应，产生无机磷酸和相应的醇、

碱性磷酸酶的分离提取及比活力的测定

一、实验原理 碱性磷酸酶（alkalinephosphatase EC3.1.3.1简称为ALPase）广泛存于微生物界和动物界。ALPase能催化几乎所有的磷酸单酯的水解反应，产生无机磷酸和相应的醇

从用紫杉醇稳定的微管中分离基于微管的运动蛋白

实验材料脑组织试剂、试剂盒PME 缓冲液仪器、耗材匀浆器实验步骤一、分离驱动蛋白1. 以每克组织 1.5 ml PME 缓冲液的比例进行组织匀浆，匀浆物在 39000 g 离心 30 分钟。PME 缓冲液：0.1 mol/L PIPES，pH 6.92 mmol/L EGTA1 mmol/L MgS