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单向聚丙烯酰胺凝胶电泳实验一肽类的电泳 (TricineSDSPAGE) 实验
实验方法原理 | 在定量分析蛋白质混合物方面,最广泛采用的蛋白质组学方法就是SDS-PAGE。 因为它根据蛋白质的大小不同分离蛋白,所以对于检测蛋白纯度特别有用,同时也应用于蛋白质相对分子质量(Mr)的测定。影响到SDS-PAGE蛋白分离效果的因素有: ①丙烯酰胺与交联剂(双丙烯酰胺)的比例; ②用于制备浓缩胶和分离胶的丙烯酰胺/双丙烯酰胺的比例;③浓缩胶和分离胶缓冲液pH及成分; ④样品制备的方法。 典型Laemmli胶系统(Laemmli,1970)采用甘氨酸电泳缓冲液,能分离分子质量范围.约3000?200000Da的蛋白。本方案中使用的是ScMgger和vonJagow(1987)的tricine凝胶系统,其中用tricine[三(轻甲基)甲基甘氨酸]代替了甘氨酸。这一系统可以分离小至500Da的肽类,适合SDS-PAGE肽图谱以及制备氨基末端、羧基末端测序的样品 | ||||
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实验材料 | 蛋白溶液或块状细胞蛋白 试剂、试剂盒 | 下槽缓冲液分离胶混合物浓缩胶混合物上槽缓冲液
实验步骤 | 1.按方案1制备不连续凝胶。 2.分别往电泳上槽和下槽中注入对应的电泳缓冲液。 3.按方案1的方法制备凝胶的蛋白质上样样品。 4.每块胶以恒流25mA,从负极到正极开始电泳。 5.选用方案2或方案7中介绍的考马斯亮蓝或银染法使蛋白显现。
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