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单向聚丙烯酰胺凝胶电泳实验一InstaStain Blue 凝胶纸染色实验
实验材料 | 经单向凝胶电泳分离后的蛋白质样品 仪器、耗材 | 滤纸玻璃板玻璃棒InstaStainBlueGelStainPaper微波炉塑料容器
实验步骤 | 1.电泳结束后,在一塑料容器中倒入足够浸没凝胶的水,例如,一块典型的mini胶(8cmXl0cm或8cmX8cm)需要IOOml水。将凝胶放入容器中,轻摇5min。 2.用水重复洗两次以上(洗涤的总时间是l5min)。 3.弃去水,加入足够浸没凝胶量的试剂A,室温下摇动凝胶1〇111^。 4.从试剂A中取出凝胶,放置到一块玻璃板上。注意保持凝胶湿。 5.将InstaStamBlueGelStainPaper放到凝胶上,注意蓝色面朝下。用玻璃棒碾平赶出气泡。 6.用试剂A湿润三张滤纸,将湿润的滤纸放置到instastainBlue凝胶染色纸上面。用玻璃棒碾平赶出气泡。I^ 7.把第二块玻璃板放到滤纸上。 8.将凝胶/纸/玻璃板夹层放进微波炉,用「高」档加热至温热(约8s)。勿让凝胶过热,胥则会粘住InstaStainBlue凝胶染色纸。 9.移去上层玻璃板、滤纸和InstaStainBlue凝胶染色纸,将凝胶放进装有足够浸没凝胶的试剂A的容器中。
10.室温摇动凝胶Ih。 11.弃去试剂A,室温下用水清洗凝胶至少Ih直到背景变得理想。这样,含有20ng蛋白量的条带就能显现。 这块凝胶能在水中保存过夜,而且灵敏度不会降低,条带的颜色也不会变浅。
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