电泳仪

5.2.3 氢氧化甲基汞琼脂糖凝胶电泳一氢氧化甲基汞琼脂糖凝胶电泳

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试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
(一)材料与设备

1)水平电泳装置。

2)水浴

3)4X甲基汞凝胶电泳缓冲液:200mmol/L硼酸,20mmool/LN2B4O7.H2O,40mmol/LNa2S04(pH8.0)

4)2X凝胶加样缓冲液:

lmol/L氢氧化甲基汞                 25u1

4X甲基汞凝胶电泳缓冲液           500ul

甘油                                                       200ul

溴酚蓝                          2ug

5)0.5ug/ml溴化乙锭

6)0.lmol/L乙酸铵溶液


(二)操作方法

1)制备凝胶:大于或等于1kb的RNA用1%琼脂糖,小于1kb的RNA用1.4%琼脂糖.将琼脂糖溶于1X甲基汞凝胶屯泳缓冲液,冷却至55°C后,加氢,氧化甲基汞至终浓度为5mmol/L,随后灌胶。

2)电泳:将等体积的2X凝胶加样缓冲液与RNA溶液混勻,点样,电泳。

3)结果观察:电泳结束后,用含0.4g/ml溴化乙锭的0.lmol/L乙酸铵溶液浸泡凝胶即30〜45min,进行RNA染色,在紫外灯下观察。铵离子使甲基汞转化为带电的非挥发性复合物,并促使溴化乙锭与RNA的结合。
注意事项
1)氢氧化甲基汞是剧毒品,且挥发性极强.最好在通风橱中操作。

2)氢氧化甲基汞应加入凝胶中而不能加入到甲基汞凝胶电泳缓冲液中。这种化合物不带电荷,因此不能很快迁移出凝胶。然而如果电泳过程中将凝胶浸在电泳液中,则甲基汞离子会扩散至凝胶外。为避免这问题,可调整电泳缓冲液的液面,使之能与凝胶的各边保持完全接通,而不溅到凝胶表面。加样完毕且RNA进入凝胶后,用保鲜膜覆盖凝胶,以防止它在电泳过程中干涸。