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微量制备毛细管电泳实验一单次分离
实验方法原理 | |||||||||||
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实验材料 | 多肽:ACTH4-10 试剂、试剂盒 | 4:1(V/V)0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH2.50)/乙烯乙二醇0.1mol/L氢氧化钠 仪器、耗材 | 150μm内径的融合硅毛细管柱CE仪器锥形微量瓶
实验步骤 | 1.制备多肽混合物和预处理柱子(见多次分离步骤1和2)。 2.在0.5lb/in2,10s内用低压注射上样0.1μl多肽混合物。 3.使用以下条件分离多肽混合物: 电解质:0.05mol/L磷酸钠缓冲液,pH2.30 探测波长:200nm 温度:25℃ 电压:7.5kV 分部大小:每收集管3min 4.用一系列的含10μl4:1(V/V)0.5mol/L磷酸钠缓冲液/乙烯乙二醇的微量锥形瓶替换标准的出口池(正极)。收集3min的流分于每一个瓶子用于分析分离的长度。 5.用分析分离方法(见解析多肽分离实验)筛选含多肽的流分。 注意事项 | 对于单收集方法,CE仪器必须能有效地控制在高电压水平时的毛细管温度,因为高电压水平是电泳所必需的。鼓风式冷却通常不适合该目的。 其他 |
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