1.Fixcells-Add16%formaldehydedirectlyintoculturemediumtoobtainafinalconcentrationof1.5%formaldehyde.

2.Incubateinfixativefor10minatRTandpellet.

3.PermeABIlizecells-ResUSPendpelletwithvigorousvortexingin500ulice-coldMeOHper10^6cells.Thisisapproximatenumber,moreorlessMeOHcnabeusedaslongasevaporationisnotsignificant.

4.Incubateat4Cforatleast10min.Atthispointcellscanbestoredat-20Cforseveralweekswithminorlossinsignalstrength.

5.Washcellstwiceinstainingmedia(PBScontaining1%BSA)thenresuspendinstainingmediaat.5-1x106cellsper100ul.

6.Staincells-Addoptimalconcentrationsofantibodyandincubatefor15-30minatRT.

7.Washcellsin15volumesofstainingmediaandpellet.

8.Resuspendsamplesinstaingingmediaandanalyze.

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