2021-07-31【求助】有那位前辈用过clontech公司的SMART技术构建过cDNA文库

我们曾做过cDNA文库构建，建议最好还是提mRNA来做比较可靠，总RNA中mRNA的比例很小，所以cDNA的量也可能少的多，而且还有rRNA的干扰

我的结果也和你一样，真不知道该怎么办了啊，现在我已经做了3次LD-PCR了，但是什么都没有，试剂盒的东西这么少，我该怎么办啊，请问你作出了吗，有什么好的建议吗

我也准备用这个做，不过还没有开始。想请教一下楼上的几位，你们第一链合成的时候做平行试验了么，不做可不可以啊，那个反转录酶只有5ul，这么一做就剩不多了。

建议直接交给公司做！ps：考虑清楚是不是有必要建库。

可以试试Gateway技术建库

可是我们已经买了这种试剂盒，总要做下去吧？难道是试剂盒有问题，唉，clontech!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!

西安交通大学学报(医学版),编辑部邮箱2004年03期人正常肾组织全长CDNA文库的构建及鉴定

首先我觉得RNA提的不是很好再次我觉得用mRNA比较好，试剂盒上也要求用mRNA吧，我们用的是taKaRA的试剂盒

我也遇到跟楼主一样的问题，LDPCR后电泳什么都没有，真晕！就那么5微升的酶怎么敢随便折腾啊。试剂盒上好像是说提了mRNA用的是PrimerExtention法，提总RNA就是用LDPCR法。不知楼主后来是怎么解决问题的，盼赐教!

我也买了,还没敢下手.请问一下过柱子时用的xylenecyanoldye在那买的谢谢

......那是你们加的循环不够,我们作过引物延伸和长距离的,都比试剂盒指定的多了几倍.介意p40个循环.我们做了5次,都p出了东西.试剂盒应该没问题的

我买了ＣＬＯＮＴＥＣＨ公司的ＳＵＰＥＲ　ＳＭＡＲＴ试剂盒和消减试剂盒．其中也有ＬＤ　ＰＣＲ的过程，结果很好呀，２２-２３个循环的结果最好，我直接做了，也没有拿胎盘对照先试试，我觉得只能做７次，没舍得试，不过做了２次，结果都令人满意，可能是我刚买的盒子，没啥问题，建议买回来后分装，减少反复冻融的次数．

楼上的请问下直接用RNA做好不好，或者有什么注意的问题呢？

直接做也可以，不过要注意说明书上按用RNA的操作说明做，没问题，你可以看看SMART的技术原理就明白了，祝你成功！

我们这里有个师兄是用的这个盒子建的

我没用过clontech,我只做过stratagene的表达CDNA文库。但是建议你与厂家的售后服务联系一下，他们会给你找以下原因的。

我没用过clontech,我只做过stratagene的表达CDNA文库。但是建议你与厂家的售后服务联系一下，他们会给你找以下原因的。

我没用过clontech,我只做过stratagene的表达CDNA文库。但是建议你与厂家的售后服务联系一下，他们会给你找以下原因的。

刚看到这个帖子，你这个库应该建的很成功吧，我现在是不知道要怎么来筛克隆，请指教一下！