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Analysis of total E. coli protein by SDS PAGE
蚂蚁淘
/发布时间:1545758620 /浏览量:58
HahnLab
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1.Inmicrofugetubes,spindown0.1mlofuninducedcellsgrowntonearsaturationor0.15mlofIPTGinducedcells.RemoveYT(orLB)mediawithapipetmanordrawnoutpasteurPipetteandfreezecellpelletsforlateranalysis.
2.Add120microliters1XSDSPAGEloADIngbuffertocellpelletandvortexuntilcellsareresUSPended.
3.Boilcells5mininH2Obathorheat5minin95degreeheatingblock.
4.Spintubesinmicrofugefor5minutes.
5.Load6-10microliterstoNovexNuPAGEgelsandstainwithcommassieblue.Note:BoiledcellscanbeviscousduetothecellularDNA.Ifveryviscous(hardtoloadongel),trytopipettheSDSPAGEloadingbufferfromaregionofthetubewithalowviscosity.
1XSDSPAGEloadingbuffer
NuPAGEloadingbuffer(120microliters):30microliters4XNuPAGEloadingbuffer(heatinwarmH2Oforafewminutes)60microliters0.1MDTT(16mg/ml)30microlitersH2O
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