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Analysis of total E. coli protein by SDS PAGE

蚂蚁淘  /发布时间:1545758620 /浏览量:57   

HahnLab

lastmodified9/30/98

1.Inmicrofugetubes,spindown0.1mlofuninducedcellsgrowntonearsaturationor0.15mlofIPTGinducedcells.RemoveYT(orLB)mediawithapipetmanordrawnoutpasteurPipetteandfreezecellpelletsforlateranalysis.

2.Add120microliters1XSDSPAGEloADIngbuffertocellpelletandvortexuntilcellsareresUSPended.

3.Boilcells5mininH2Obathorheat5minin95degreeheatingblock.

4.Spintubesinmicrofugefor5minutes.

5.Load6-10microliterstoNovexNuPAGEgelsandstainwithcommassieblue.Note:BoiledcellscanbeviscousduetothecellularDNA.Ifveryviscous(hardtoloadongel),trytopipettheSDSPAGEloadingbufferfromaregionofthetubewithalowviscosity.

1XSDSPAGEloadingbuffer

NuPAGEloadingbuffer(120microliters):30microliters4XNuPAGEloadingbuffer(heatinwarmH2Oforafewminutes)60microliters0.1MDTT(16mg/ml)30microlitersH2O

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