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从抗血清、腹水或杂交瘤上清液中纯化免疫球蛋白G组分一饱和硫酸铵沉淀IgG

蚂蚁淘 /发布时间:1631208604 /浏览量:120

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实验方法原理	虽然亲和层析法是进行特异性抗体纯化的首选，然而有时这种纯化方式却非必需，或者无法实施进行（如有时抗原量不充足）。
实验材料	抗血清、腹水或杂交瘤上清液
试剂、试剂盒	饱和硫酸铵溶液（SAS)
仪器、耗材	透析膜（MWCO12000〜14000）、涡旋混合器
实验步骤	1)于4℃不断搅拌，往2体积的抗血清、腹水或组织培养上清中，逐滴加入1体积SAS溶液。加完后置于4℃，不间断地搅拌2〜4h以形成沉淀。 2)4℃12OOOg离心20min,用预冷的溶于PBS的33%SAS溶液在涡旋混合器上振荡洗涤沉淀，所用溶液的体积与原抗血清、腹水或组织培养上清等体积，重复洗涤。 3)在涡旋混合器上温和振荡将沉淀溶于合适的预冷的缓冲液中（5%〜10%的原始体积)。 4)4℃透析IgG溶液48h以上，期间换3次（每次换4L)所需缓冲液，以去除硫酸铵。
注意事项
其他