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制备肌动蛋白实验一从肌肉制备丙酮粉用于纯化肌动蛋白
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| 实验材料 | 肌球蛋白 |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | 肌球蛋白抽提溶液 |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1.抽提肌球蛋白时得到的沉淀物用3倍于沉淀物体积的肌球蛋白抽提溶液抽提10分钟。 肌球蛋白抽提溶液： 0.5mol/LKCl 0.1mol/LK2HPO4 2.抽提物离心（GSA转头，13000r/min，17310g）15分钟，去掉上清。 3.在肌肉残渣中加1L冷的dH2O，搅拌，然后用1mol/LNa2CO3调pH到8.2~8.5。 把混和物分到6个250ml的瓶中，离心（GSA转头，13000r/min，17310g）15分钟离下含肌动蛋白的不溶物。 4.去掉上清。然后如步骤3所述再次离心。倒掉上清并用合适的记号笔画出沉淀物的轮廊（这可以在以后的步骤中确定什么时候沉淀物开始涨大）。加足量冰冷的dH2O装满离心瓶以重悬沉淀物。大概重复4次直到沉淀物开始涨大。 5.沉淀物一开始涨大，不管用水洗的次数是多少，都接着进行下个步骤。 6.在250mlGSA离心桶中用冰冷的丙酮重悬肌肉残渣，剧烈搅拌大约20分钟。 7.离心（CSA转头，13000r/min，17310g）沉淀15分钟并去掉上清。此外，沉淀可以在Bounce漏斗上过滤。 8.重复步骤6和7。 9.把沉淀的蛋白铺在滤纸上（例如Whatman3MM)并让它在室温过夜干燥。 10.第二天，如步骤6所述的那样，把干了的丙酮粉重悬在氯仿里并离心以去掉多余的脂肪。过滤并干燥沉淀。 |
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