一、材料

1.缓冲液及溶液

乙醇

酚：氯仿（1:1,V/V)

醋酸钠（3mol/L,pH5.2）

STES缓冲液（0.2mol/LTris-Cl(pH7.6)，0.5mol/LNaCl，0.1%(m/V)SDS，0.01mol/LEDTA，室温保存）

TE(pH7.6)

2.专用设备

酸洗过的玻璃珠（0.4mm)

3.细胞和组织

新鲜的琼脂平板培养的克隆或液体的过夜培养的酵母细胞

二、方法

1.准备用于裂解的酵母细胞。

(1)平板培养的酵母克隆

使用无菌的接种环将一个或几个大的、新鲜培养的克隆转移到加有50μlSTES缓冲液的微量离心管中。

(2)液体培养的酵母

①将1.5ml过夜培养的酵母细胞转移到微量离心管中。

②用最大转速室温下离心1min,收集沉淀下来的细胞。

③吸去培养介质，将细胞重悬于50μlSTES缓冲液中。

2.向酵母悬浊液中加入50μl酸洗过的玻璃珠。每管加入20μlTE(pH7.6)。

3.加入60μl酚:氯仿。盖上盖子，振荡1min,使有机相和水相充分混合。

4.用最大转速室温下离心5min。

5.将上层水相转移到一个新的离心管中。0℃下用乙醇沉淀15min。

6.用最大转速4℃下离心10min,收集核酸沉淀。

7.吸去上清，用100μl水配制的70%乙醇洗涤沉淀。用最大转速室温下离心1min。

8.吸去上清。空气中干燥DNA沉淀15min。将沉淀溶于40μlTE（pH7.6）。