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将基因转移至未分化ES细胞实验一分配96孔板上细胞用于冻存和体外分化
蚂蚁淘
/发布时间:1533259706 /浏览量:40
| 试剂、试剂盒 | DMSOPBS胰酶溶液冻存液 仪器、耗材 | 平底96孔板移液器ES生长培养基ES分化培养基
实验步骤 | 1.准备下列试剂和材料： DMSO（组织培养级） 平底96孔板 多道移液器 无菌多道移液器容器 ES生长培养基 ES分化培养基 无Ca2+和Mg2+PBS 胰酶溶液 2X冻存液 2.PBS冲洗96孔板上的ES细胞两次，200μl/孔。 3.每孔中40μl胰酶溶液，37℃孵育5分钟。显微镜下观察细胞脱落和分离情况。 4.胰酶消化的同时，准备2X细胞冻存液（FCS+20%DMSO）。 5.在胰酶消化细胞中加60μl培养基，吹吸分散细胞。 6.在新的无菌96孔板每孔中加50μl2X细胞冻存液。 7.取50μl胰酶消化的ES细胞，直接加入冻存液中，吹吸一次混匀。细胞转移到-80℃冻存，直至鉴定出具有预期表型的克隆。 8. ES分化培养基稀释剩余细胞，悬滴培养。 9.体外分化后，鉴定具有预期lacZ表型的克隆，融化相应的冻存细胞，用于进一步分析。
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