相关文章
促销商品
最新问答
- [07-28]【求助】Trizol法提取RNA时各试剂的作用 核酸基因技术论坛
- [10-03]前辈们哪种RNA抽提试剂盒比较好用
- [07-26]微量RNA的cDNA PCR文库的构建
- [08-01]培养细胞RNA的提取(采用Trizol试剂盒提取RNA) 实验方法
- [10-03]TRIzol(Invitrogen)试剂的性能描述及注意事项
- [08-02]RNA干扰幻灯片.ppt
- [10-03]—RNA干扰的“成功”与“磨难”
- [10-01]OMEGArna提取试剂盒中文说明总RNA提取
- [07-23]RNA提取中各种试剂的作用.doc_
精选品牌
热卖商品
mRNA的提取及纯化实验一亲和柱层析法
蚂蚁淘
/发布时间:1626715802 /浏览量:472
| 实验方法原理 | 该方法利用mRNA上的寡聚A可与较联寡聚T的纤维素柱在高盐下以碱基配对形式发生亲和吸附，而在低盐下，碱基配对能力破坏，吸附解除，而其他成分的RNA则不具该特性，因此在高盐下当RNA抽提样品流经该柱时，mRNA被挂在柱上，而其他RNA则随高盐溶液流出；当用低盐洗脱液洗柱时，mRNA随洗脱液流出。再用有机溶剂沉淀则可得纯化mRNA。 | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | mRNA 试剂、试剂盒 | 十二烷基肌氨酸钠EDTANaClTris-HCl洗脱液SDS
实验步骤 | 1. DEPC处理层析柱。 2. 0.1MNaOH处理Oliga(dT）－纤维素。 3. 用1×上样液洗柱至pH<8.0。 4. 无菌水溶解RNA，65℃温浴5分钟后，迅速冷却至室温，加等体积2×上样液，上样，分部收集。 5. 1倍体积1×上样液洗柱，分部收集。 6. OD260沉淀收集液，确定收集液的该值是否接近0，如该值仍很大，则上样液继续洗柱，直至该值接近0。 7. 2~3倍柱床体积的洗脱液，洗柱，分部收集。 8. 测定各收集管的OD260，将有吸光值的各管合并。 9. 在洗脱液中加入0.1体积的NaAC，1体积的异丙醇，-20℃沉淀过夜，12000g离心10min，75%乙醇洗沉淀，真空干燥。 10. 提取mRNA质量的分光光度计检测，将所提mRAN分别在260，280nm比色，要求A. OD260%/OD280%不小于2.0及40μg所提样品在OD260%的值为1。 11. 提取mRNA质量的电泳检测，在1%的变性胶上，EB染色后，mRNA应在0.5-8Kb间均匀着色，1.5-2Kb间着色较强。
================ 蚂蚁淘在线 ================ 免责声明：本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容 版权声明：未经蚂蚁淘在线授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘在线”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。 相关阅读
|
