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用于 PCR 的模板 DNA 制备实验一冰冻片

蚂蚁淘  /发布时间:1629048602 /浏览量:114   

实验方法原理
实验步骤

1.将10μl冰冻切片直接放入含组织裂解液的离心管中。


2.无菌尖头刀片刮下，放入300～900μl组织裂解液中，并加入20mg/ml蛋白酶K（PK）10～15μl，封口膜封口，置55℃3h以上。


3.其间用指轻弹离心管以利裂解。若有沉淀，再加入5～10μl蛋白酶K，直至无沉淀已澄清为止。


4.灭活蛋白酶K裂解液中含有蛋白酶K，需放入沸水中10min以灭活蛋白酶K。


5.沉淀蛋白质按裂解液量的1/3加入蛋白质沉淀液（饱和乙酸钠）并混匀，14500r/mm离心15min。此时，蛋白质沉于管底，DNA溶解于上清液中。


6.析出DNA取上清液并加入等量冷异丙醇，充分混匀，新鲜标本此时可见DNA丝缠绕成团析出。若新鲜标本童太少或固定组织因DNA片段较小，无法用肉眼见到DNA成团析出，需14500r/min再离心10min，一般DNA可见于管底。


7.洗涤溶解DNA倒去上清液，加入适量的75％冷乙醇，以洗掉残存的异丙醇和无机盐等物质，反复洗2遍。将管底含有DNA的离心管倒扣在清洁纸上，以挥发掉残留的乙醇和水。约30min后，在DNA尚不太干时加入适量TE溶解DNA。

注意事项
其他

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