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质粒DNA的大量提取和纯化实验一碱法
蚂蚁淘
/发布时间:1627839003 /浏览量:47
| 实验材料 | 细菌 试剂、试剂盒 | STE酚氯仿NaClPEG乙醇 仪器、耗材 | 离心管离心机抽干机
实验步骤 | 1、取培养至对数生长后期的含pBS质粒的细菌培养液250ml，4℃下5000g离心15分钟,弃上清,将离心管倒置使上清液全部流尽。 2、将细菌沉淀重新悬浮于50ml用冰预冷的STE中（此步可省略）。 3、同步骤1方法离心以收集细菌细胞。 4、将细菌沉淀物重新悬浮于5ml溶液I中,充分悬浮菌体细胞。 5、加入12ml新配制的溶液II,盖紧瓶盖,缓缓地颠倒离心管数次,以充分混匀内容物,冰浴10分钟。 6、加9ml用冰预冷的溶液III,摇动离心管数次以混匀内容物,冰上放置15分钟,此时应形成白色絮状沉淀。 7、4℃下5000g离心15分钟。 8、取上清液,加入50mlRNA酶A(10mg/ml),37℃水浴20分钟。 9、加入等体积的饱和酚/氯仿,振荡混匀,4℃下12000g离心10分钟。 10、取上层水相,加入等体积氯仿,振荡混匀,4℃下12000g离心10分钟。 11、取上层水相,加入1/5体积的4mol/LNaCl和10%PEG(分子量6000),冰上放置60分钟。 12、4℃下12000g离心15分钟,沉淀用数ml70%冰冷乙醇洗涤，4℃下12000g离心5分钟。 13、真空抽干沉淀，溶于500mlTE或水中。
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