DNAPrecipitation

Phenol(removesprotein)

1. addequalvolumeofPhenol(=tris-saturatedPhenol-Chloroform-Isoamyethanol)
2. vortex
3. spin2minutesat12000rpm4°C
4. transfersupernatanttoafreshtube(avoidaspirationoftheinterlayerororganicphase)

Chloroform(removesphenol)

1. addequalvolumeofChloroform
2. vortex
3. spin2minutesat12000rpm4°C
4. transfersupernatanttoafreshtube(avoidaspirationoftheinterlayerororganicphase)

100%Ethanol(precipitatesDNA)

1. add0.1volume3Msodiumacetate
2. add2.5volumes100%Ethanol
3. vortex
4. precipitateat:
   • -20°Covernight(+++)
   • -80°C1h(++)
   • dryice15min(+)
5. spin20minutesat12000rpm4°C
6. carefullypourout/aspiratesupernatant(donotloseDNA-pellet)

1. carefullyadd1mLcold70%Ethanol(donotvortex)
2. spin10minutesat12000rpm4°C
3. carefullypourout/aspiratesupernatant(donotloseDNA-pellet)
4. airdry10minutesatroomtemperature(donotoverdry,becauseDNAbecomeshardtodissolve)
5. dissolvein:
   • 10mMTrispH7.5(+++)
   • TE-Buffer(++)-EDTAmayinhibitdownstreamenzymaticreactions
   • dH₂O(+)-freezeat-20°CbecauseunbufferedDNAundergoesdegradation

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