DNA提取纯化试剂

MINI PREP BY BOILING

  1. Pellet1.5mlofanovernightcultureat12,000rpminEppendorfcentrifugeatRTfor3min.
  2. ResUSPendbacterialpelletin350µlofSTETbuffer.
  3. Add25µloffreshlypreparedsolutionoflysozyme(10mg/mlin10mMTris-Cl,pH8).Mixbyvortexingfor3sec.
  4. Placethetubeinaboilingwaterbathforexactly40sec.
  5. Centrifugethelysateat12,000gfor10minatroomtemp.
  6. Removetheglobofbacterialdebriswithasteriletoothpick.
  7. Addtothesupernatant40µlof2.5MNaOAc(pH5.2)and420µlofisopropanol.Mixbyvortexingandstorethetubefor5minatroomtemp.
  8. Centrifugeat12,000gfor5minat4°C.
  9. Removethesupernatantandwashwith1ml70%ethanol.
  10. DrythepelletandresuspendinTE(pH8)withRNaseA(20µg/ml).

STETbuffer:
0.1MNaCl
10mMTris-Cl,pH8.0
1mMEDTA,pH8.0
5%TritonX-100

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