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Quick DNA Plasmid Prep
蚂蚁淘
/发布时间:1545759237 /浏览量:186
QuickDNAPlasmidPrep
Thisprotocolgivesverycleanplasmidprepsforrestrictiondigestsandcloning.However,duetothealkalinelysisstep,theDNAisoftennickedandmaynotgiveexceptionalsequencedata.
Solutions
TENS
0.1NNaOH1ml10NNaOH
0.2%SDS1ml20%SDS
10mMTris7.51ml1MTris7.5
1mMEDTA200ul0.5MEDTA
upto100mlwithQ
storeatroomtemperature
3MNaOAc5.2
24.6ganhydroussodiumacetate
pHto5.2withaceticacidandbringupto100mlwithQ
Procedure
•Inoculatea2mlovernightculturewithasinglecolony.
•Pellet1.5mloftheovernightcultureandaspirateallbut50mloftheLB.
•ResUSPendthecellpelletintheremainingLBandadd300mlTENS.
•Vortex,andadd150ml3MNaOAc5.2.
•Vortexagainandspinfor2minutesinthemicrofuge.Discardthepelletusingatoothpick.
•Add300mlphenol/chloroform,vortexandspinfor5minutesinthemicrofuge.
•Retrieve200mlofaqueoussupernatantandadd600mlEtOH.Spinfor10minutesinthemicrofuge,washanddrythepellet.
•Resuspendin40mlTE.5mlisgenerallysufficientforrestrictiondigests(addRNaseA).
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