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回复:时间:2005-10-22
尿素的作用可溶解蛋白质,有些文献中用8M的浓度(配置溶液时需要加热才能溶解尿素).溶解后可能会变性,需要复性.我的蛋白复性的过程于下:(1)将蛋白溶液放入低吸附试管内,缓慢滴加等体积的PBS,轻摇混匀,置冰上30min(此时尿素浓度降至4M);(2)将溶液转入透析袋中,然后将透析袋浸于透析液(3MUrea、2mMGSH、0.2mMGSSG、PBSpH7.4)中,4℃搅拌透析过夜;(3)次日将透析液更换为(2MUrea、2mMGSH、0.2mMGSSG、PBSpH7.4),并缓慢向透析杯中滴加1000mlPBS,以缓慢降低Urea浓度,使蛋白自然复性。(4)最后用聚乙二醇(PEG400)浓缩复性蛋白。
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