重组蛋白定制相关交流-蚂蚁淘在线

服务名称：	重组蛋白定制
提供商：	北京吉田生物科技有限公司
规格：	次

蛋白表达与纯化服务介绍
1.大肠杆菌表达系统：遗传背景清楚，培养简单，繁殖迅速，生长周期短，相比真核表达系统，表达成本低，表达量高，应用广泛，易放大生产，是生产重组蛋白的必备的科研工具。
博欧特生物提供有多种表达体系（pET, pQE,pMAL,pGEX,pBAD等系列表达载体及配套菌株），丰富的标签选择如His, Flag, GST, Trx, MBP, SUMO, DsbA以及组合型双标签等，为可溶性表达和下游纯化提供了便利。我们生产储备有rTEV, rEK等多种特异性蛋白酶，可根据客户需求进行融合标签的移除。

大肠杆菌表达系统
服务编号	服务项目	服务内容	交付内容	服务周期	服务价格
OTA1	重组载体构建	按客户意向或咨询表要求，构建到相应的融合标签载体上	测序报告	1-2周	请咨询
OTA2	表达小试及条件优化	通过转化不同表达菌株和表达条件，挑选最优的方案进行目标蛋白的表达。	SDS-PAGE表达图谱	1周	请咨询
OTA3	蛋白表达和纯化	摇瓶培养1L表达菌液，通过各种纯化方案获得目的蛋白。（融合蛋白可依据需求进行标签的切除，再次纯化得到目的蛋白）	1-5mg目的蛋白，纯度大于90%，最终纯化蛋白SDS-PAGE鉴定图谱	1-2周	请咨询
OTA4	表达纯化按量要求	蛋白量1mg，纯度>90%	规定要求量的目的蛋白，纯度大于90%，最终纯化蛋白SDS-PAGE鉴定图谱	1-2周	请咨询
OTA5		蛋白量5mg，纯度>90%		2-3周	请咨询
OTA6		蛋白量10mg，纯度>90%		2-4周	请咨询

2.毕赤酵母表达系统：遗传背景较为清楚，培养简单，可放大生产和高密度发酵，广泛应用于酶制剂，疫苗抗原，以及细胞因子等蛋白的工业化生产。毕赤酵母兼具原核的生产特点和类似高等真核生物的翻译后修饰功能，使该系统在蛋白生产上具有得天独厚的优势，成本低，周期短，可生产接近于天然构象的重组蛋白。
胞内表达型pPIC3.5K, pAO815; 分泌型pPIC9K, pPICZα, pGAPZα.
酵母菌株：X33，GS115，SMD1168，SMD1168H,KM71

毕赤酵母表达系统
服务编号	服务项目	服务内容	交付内容	服务周期	服务价格
OTB1	重组载体构建	按客户意向或咨询表要求，构建到相应的融合标签载体上	测序报告	1-2周	请咨询
OTB2	多拷贝串联	体外构建目的基因的多拷贝串联，通过基因剂量的增加获取更大的蛋白表达量	核酸电泳鉴定图谱	按构建拷贝数不同	请咨询
OTB3	电转化和筛选	电转线性化质粒到合适的酵母表达宿主，对重组克隆进行抗性筛选和PCR鉴定。	PCR鉴定图谱	1-2周	请咨询
OTB4	表达小试	选取10株阳性重组子进行小量诱导表达	表达上清SDS-PAGE图谱	1-2周	请咨询
OTB5	蛋白表达和纯化	选取表达最好的重组菌株，按客户需求量进行放大培养。发酵液上清预处理及分泌表达蛋白的纯化	0.2-2mg纯化蛋白,纯度大于90%。最终纯化蛋白SDS-PAGE鉴定图谱	2-4周	请咨询
OTB6	表达纯化按量要求	蛋白量1mg，纯度>90%	规定要求量的目的蛋白，纯度大于90%，最终纯化蛋白SDS-PAGE鉴定图谱和WB鉴定图谱	2-3周	请咨询
OTB7		蛋白量5mg，纯度>90%		2-4周	请咨询
OTB8		蛋白量10mg，纯度>90%		3-5周	请咨询

3.昆虫-杆状病毒表达系统：在多角体启动子控制下进行高效表达，能够容纳较大的外源基因片段，可以对表达产物完善的加工和翻译后修饰，较易从无血清培养上清中纯化蛋白。杆状病毒表达系统可为高表达的外源蛋白在细胞内进行正确折叠、二硫键的搭配及寡聚物的形成提供良好的环境，可使表达产物在结构及功能上非常接近于天然蛋白，从而具备完整的生物学功能，已被广泛应用于病毒疫苗研发及大多数真核蛋白的制备。
杆状病毒表达载体：pFastBac, pBacPAK
昆虫细胞：SF9，SF21

杆状病毒-昆虫表达系统
服务编号	服务项目	服务内容	交付内容	服务周期	服务价格
OTC1	重组杆粒构建	将目的基因构建到pFastBac改造载体中，转化大肠杆菌Bac菌株，利用转座子原理，筛选到重组杆粒。	重组杆粒，核酸电泳图谱和测序报告	2-3周	请咨询
OTC2	共转染昆虫细胞，获取重组杆状病毒	重组杆粒转染昆虫细胞，获得P1病毒，连续转染获取更高滴度的杆状病毒	P1，P2或P3代病毒	2-3周	请咨询
OTC3	表达小试	感染适量昆虫表达细胞，收获昆虫细胞和培养基上清，进行表达鉴定	表达上清液，SDS-PAGE表达或WB鉴定图谱	1-2周	请咨询
OTC4	蛋白表达和纯化	按需求量感染批量昆虫细胞，收获昆虫细胞和培养基上清，进行纯化及鉴定	最终纯化蛋白SDS-PAGE鉴定图谱和WB鉴定图谱	2-3周	请咨询

4.哺乳动物细胞表达系统：能够指导蛋白质的正确折叠，提供复杂的糖基化和唾液酸化等其它生物所不具备的多种翻译后修饰功能，使得表达产物在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然的高等生物蛋白质，哺乳动物细胞表达系统已广泛应用于基因工程蛋白药物和诊断试剂盒蛋白原料的生产，在新基因的发现、蛋白质的结构和功能研究中也具有极为重要的作用。
质粒型载体：pcDNA4.1, pHEK293
哺乳动物细胞：HEK293,CHO, NIH 3T3, COS-7

哺乳动物细胞表达系统
服务编号	服务项目	服务内容	交付内容	服务周期	服务价格
OTD1	重组载体构建	将目的基因构建到哺乳细胞表达载体中，筛选阳性克隆；大量制备重组质粒,用于瞬时表达或稳定表达	重组载体及测序报告	2-3周	请咨询
OTD2	小试表达和鉴定（瞬转）	转染适量哺乳细胞，培养2到4天，收获细胞，从细胞裂解液中鉴定蛋白表达情况	表达上清液，SDS-PAGE或WB鉴定图谱	1-2周	请咨询
OTD3	稳定转染和细胞系筛选	转染适量哺乳细胞，使用抗生素连续筛选和传代培养，获得稳定表达细胞株	稳定细胞株2株，表达上清液，SDS-PAGE或WB鉴定图谱	6-8周	请咨询
OTD4	批量表达与纯化	按客户需求量转染大量哺乳细胞，对表达上清进行纯化和鉴定	纯化蛋白SDS-PAGE鉴定图谱和WB鉴定图谱	2-3周	请咨询

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