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细胞膜流动性测定实验一荧光探针标记法
实验方法原理 | 常用于研究膜脂流动性的荧光探针为1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)。DPH掺入到细胞膜脂烃链区后,介质粘度增加,顺反异构受到抑制,成为唯一能发光的全反构型。 | ||||||||
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实验材料 | 肿瘤细胞 试剂、试剂盒 | 磷酸盐缓冲液DPH 仪器、耗材 | 荧光分光光度计离心机
实验步骤 | 1. 取对数生长期的肿瘤细胞,以pH7.2,0.01mol/l磷酸盐缓冲液洗涤两次。 2. 取107个细胞,离心,加入2×106mol/lDPH溶液2ml。 3. 25℃振荡温育30min,再以PBS洗涤1次。 4. 悬浮于4mlPBS溶液中。 5. 测定仪器为荧光分光光度计,在激发波长362nm,发射波长432nm,狭缝10条件下测定荧光强度。 注意事项 | 由于DPH可进入细胞内部,后来又合成了其阳性离子衍生物1-(4-三甲胺苯基)-6-苯基-1,3,5-己三烯(TMDPH)。TMDPH不能透过细胞膜进入细胞,因此,理论上TMDPH标记法较DPH标记法更能准确的反映膜脂流动性。
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