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蛋白质的分离实验一IEF（等电点聚焦电泳）法

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实验材料	蛋白质
试剂、试剂盒	胶母液磷酸氢氧化钠三氯乙酸磺基水杨酸冰醋酸考马斯亮蓝
仪器、耗材	高压电泳仪IEF槽离心机
实验步骤	一、样品提取 1. 1ml原核表达细胞液离心取沉淀。 2. 沉淀用100μlIEF样品缓冲液裂解，离心取上清。二、制胶 1. 安装超薄胶装置 2. 依次加入下述试剂（1）胶母液 2ml （2）尿素 8M/脱气（3）NP-40 0.2ml （4）两性电解质 2ml （5）10%过硫酸胺 50ul （6）TEMED 5ul 3. 倒胶三、电泳 1. 预电泳胶凝固后，拆卸制胶装置，将胶连同支持膜一起置于水平电泳槽上（要求：电泳槽面板上首先被液体石蜡浸润，在凝胶支持膜与电泳槽面板间无气泡）。 2. 将分别被阴阳极缓冲液浸润的电极条置于胶面上将与阴阳电极接触的部位，盖上电泳槽罩子，连通电源，200V预电泳10min。 3. 电泳，将薄棉纸剪成小块，轻轻置于预备点样的胶面上，取10~15ul样品液，点于薄棉纸上，盖上罩子，连通电源进行电泳 4. 电泳参数：200V，30min；400V，30min；800V，4hr。四、染色 1. 固定，将电泳完的胶连同支持膜放置于固定液中，10min。 2. 显色，50℃下，将胶与支持膜放置于染色液中，显色，直至条带出现。