一、材料

1.酶和酶缓冲液

Taq聚合酶
许多Taq聚合酶都可以用；作者发现Roche公司的Taq聚合酶可以满足大多数需要.如果需要提高PCR产物的特异性，应该使用热启动聚合酶。使用Tag聚合酶本身附带的缓冲液。

2.核酸和寡核苷酸

（1）溶于水的DNA

如果DNA在TE中，应该在PCR反应混合物中添加MgCl₂.如果用从石蜡包埋的组织中纯化的DNA做模板，选择的STR标记的大小应该是78~250bp,因为这些DNA模板的完整性不定。
参照DNA可以从外周血组织或者非恶性组织中纯化获得。对于白血病，則难以获得肿瘤DNA的合适的参照DNA。因此，使用从患病期间和痊愈之后的血液中提取的DNA作参照进行分析。
肿瘤DNA。很难避免非恶性细胞对肿瘤组织的污染。对肿瘤组织进行显微解剖是避免污染的一种途径，但是该过程费时，而且产量低（参见第11章）.
为了保证获得LOH分析的信患，应该分析大量的样品。因此，纯化过程必须是可靠的，可重复的，保证可以从大量的样品中提取出高质量的DNA。—种评估肿瘤DNA质董的方法就是利用一部分样品，使用STR对已经确定的特异类型的肿瘤染色体上的LOH进行分析。

（2）引物

重要的一点就是细心地选择荧光基团以确保在所用的电泳仪器上能被检测到。例如，绿色的TET就不能在ABI3100仪器上使用。
标记的引物储备液可以保存在-20°C,稀释之后的工作液可以在4°C保存.放置黑盒中避光。

3.专用设备

热循环仪

二、方法

1.在0.2ml的离心管中，加入以下试剂。
 
DNA(溶于水）                          10~20ng

引物（每一种）*                        1pmol/L**

dNTP溶液                                   250umol/L

Taq聚合酶缓冲液             1X

Taq聚合酶（Roche)                      0.18U

H₂0加到                                         6ul***

*每一标记组的毎一种引物分别被一种荧光基团标记.

**1.5~2.0pmol的引物适合于许多反应。

***10ul的终体积用于带有热盖的PCR仪上（样品上层不加矿物油）。


2.使用下面通用的PCR扩增程序进行PCR操作。

3.在琼脂糖凝胶上分析3ul的PCR产物。如果使用了新的引物，应用琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物。在毛细管电泳之前，从96个样品中随机选择几个PCR产物进行分析。

4.如果在不同的退火温度下都没有得到PCR产物，那么在数据库中査看标记内部的CG含置和特异的CpG岛。大董的STR，特别是三核苷酸的STR,仅由C和G组成。当PCR富含GC片段时，如第5章所述加入甜菜碱和DMSO。