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多药抗药基因的表达实验一PCR扩增法
蚂蚁淘
/发布时间:1627061402 /浏览量:166
| 实验方法原理 | 大多MDR细胞膜上出现MDR-1基因及其基因产物P-糖蛋白过度表达。 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | RNA 试剂、试剂盒 | PBS氯仿异丙醇萘酸异硫氰酸肽十二烷基肌酸钠构橼酸钠乙酸钠二疏基乙醇乙醇Taq酶 仪器、耗材 | 离心机紫外分光光度计琼脂糖凝胶电泳PCR仪
实验步骤 | 一、细胞总RNA提取
2. 取细胞总RNA10ul加入20ulAMV逆转录酶反应体系中，42℃保温30min进行反转录，合成CDNA。 3. 然后置95℃，3min终止反转录。 4. 接着在Taq酶的作用下，用mdr-1和β2-MG引物，对cDNA上的目的片段进行PCR 5. 94℃预变性2min，然后94℃变性1min，50℃退火1min，72℃延伸1min，扩增35个循环。 6. 最终在60℃保温7min，以保证产物充分延伸。 7. 取10ul扩增产物在3%琼脂糖凝胶电泳后，紫外灯下照相，与mdr-1cDNA阳性对照，等位的DNA条带为阳性，反之为阴性。
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