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请教一下,一般做启动子报告基因检测,载体用pGL3,pGL4双荧光报告基因质粒,但pGL3,pGL4都只能做瞬时转染,我的细胞(不想用293做实验)质粒转染后都会死很多,还要加上一些处理因素(比如药物,饥饿等),细胞状态更不好了。所以想找一个慢病毒骨架的报告基因质粒。
上网查了下,SBI的pGreenFire1和Genecopia的Gluc-ON是慢病毒质粒。
1.pGreenFire1可以检测Luc和GFP,但用什么做内参呢?查了下文章,有的文章检测Luc的时候同时检测一个MTS读数做内参;另外有一篇文章用qPCR的方法检测了GFP和GAPDH,用GAPDH做内参。不确定这样是不是正确呢?
2.Gluc-ON检测的是分泌型的Gluc,载体上还有分泌型的碱性磷酸酶做内参。
不知有没有哪位以前用过这两个质粒的?文章用这两个质粒的都不多,不知投稿的时候会不会被质疑?
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