方案1 用带有 Fe(Ⅲ) 和 Ga(Ⅲ)的 IMAC 纯化磷酸化多肽 方案2 在 MALDI 分析之前或之后对磷酸化多肽进行碱性磷酸酶处理 方案3 结合固定化金属离子亲和介质和 MALDI-TOF-MS 直接分析方法对磷酸化多肽进行特征分析实验 方案4 离线 micro-IMAC 富集磷酸化蛋白实验 方案5 用 μLC-ESI-MS/MS 对磷酸化多肽进行分析 方案6 MALDI-MS确定酪氨酸磷酸化位点实验 方案7 用 ESI-MS 确定丝氨酸、苏氨酸的磷酸化位点实验 方案8 用 ESI-MS 确定组氨酸磷酸化位点实验 实验材料 胶内或溶......阅读全文

管坤良教授Nature子刊发表癌症研究新文章

来自加州大学圣地亚哥分校的研究人员证实，细胞能量应激诱导AMPK介导了对YAP和Hippo信号通路的调控。这一研究发现发表在3月9日的《自然细胞生物学》（Nature Cell Biology）杂志上。 著名华人科学家管坤良（Kun-Liang Guan）教授是这篇论文的通讯作者。管坤良教授主

2010全国质谱大会大会报告（四） 辉瑞-惠氏（Pfizer/Wyeth） Feng, Xidong（冯喜东）教授 来自辉瑞-惠氏（Pfizer/Wyeth）的Feng, Xidong（冯喜东）教授做了题为“Structure Elucidation of Natural Product Cyclic Peptides

武大舒红兵院士JBC免疫学研究新成果 12月10日，武汉大学的研究人员在《生物化学杂志》(JBC)在线发表了免疫学新成果，证实双特异性磷酸酶14(DUSP14)通过使蛋白激酶TAK1去磷酸化负向调控了TNF和IL-1诱导的NF-κB激活。 领导这一研究的是武汉大学生命科学学院的舒红兵教授。其主要从事免疫相关的细胞信号

Nature：乳腺癌的第一次大规模蛋白组-基因组研究成果

基于癌症基因组的Atlas (TCGA)计划的数据，美国的科学家联合小组已经完成乳腺癌的第一次大规模“蛋白基因组（proteogenomic）”研究，将DNA突变联系到蛋白信号并帮助确定癌症驱动基因。这项研究由美国国家癌症研究所的肿瘤临床蛋白质组学分析联盟成员进行，包括贝勒医学院、MIT和哈佛的

Isotype胞内染色有哪些学问？来看看这篇文章怎么说

对科研党来说，流式细胞术一点都不陌生，它以自己特有的方式从细胞蛋白水平定量检测目标蛋白的表达，并且能get到目标蛋白在各个细胞亚群中的表达，同时在细胞功能上也有很重要的作用，包括细胞凋亡，细胞周期，细胞增殖等等。 流式细胞术以细胞为研究对象，在流式细胞仪的作用下定量检测样品细胞的物理化学特征，

引物合成详解

1. 引物是如何合成的？ 目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产，而Bioneer自行研制的专利384并行高通量DNA合成仪，可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不

在读板机上进行基于时间分辨荧光标记的Western ...（二）

灵敏度和动态检测范围使用GST进行灵敏度和动态检测范围测试，使用1X上样液三倍梯度稀释GST，然后加到4-20%梯度胶中跑胶30min，然后转印到Immobilon FL膜上，使用生物素标记的兔抗-GST标记2小时，之后与Eu-标记的链霉素孵育1小时，然后洗膜，晾干使用SpectraMax
磷酸化蛋白做WB小妙招

1、一定要在Lysis Buffer中加入蛋白酶抑制剂，还要加入一定量的磷酸酶抑制剂；2、加一抗后最好4度过夜，保证抗体有充分的结合时间，因为磷酸化的蛋白只占总蛋白量的极少部分；3、选择优质的磷酸化抗体，所以要选好的厂商，Novus为全球高端抗体品牌，其磷酸化抗体效果不错；4、抗体的稀释倍数要优化，

外泌体研究miRNA成果：带你揭秘长期运动对心脏的好处 1

文章导读众所周知，运动可以降低心血管疾病的发生概率。目前已有的研究报道主要集中在肌肉因子方面，因为它具有旁分泌和内分泌作用，能够协调运动的多系统效应。然而，运动对心脏保护作用的潜在机制目前尚未可知。第四军医大学高峰、王立锋科研团队的最新研究成果表明，长期运动衍生的循环外泌体能够传递心脏保护信号，并鉴

SAPK/JNK 信号通路图

c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）又被称为应激活化蛋白激酶（stress-activated protein kinase，SAPK），是哺乳类细胞中MAPK的另一亚类。目前，从成熟人脑细胞中已克隆了10个JNK异构体，它们分别由JNK1、JNK2和JN

蛋白质翻译后修饰通过泛素化降解途径调节脂肪酸合成

2月7日，国际学术期刊《自然-通讯》（Nature Communications）在线发表了中国科学院上海营养与健康研究所李于研究组的最新研究成果“Post-translational regulation of lipogenesis via AMPK-dependent phosphoryl

孙毅/谢传明合作团队揭示E3连接酶FBXW7的抑癌新机制

FBXW7是一种抑制肿瘤生长的SCF E3泛素连接酶。在大多数情况下，FBXW7识别磷酸化底物并促进它的泛素化降解【1】。目前报道，FBXW7主要通过泛素化降解几个关键促癌蛋白，包括c-Myc、MCL-1、c-Jun、Notch1和cyclin E而发挥抑癌功能。SHOC2充当RAS和RAF的支

中科院研究揭示炎症条件下调节T细胞的负调节机制 近日，国际学术期刊《生物化学杂志》在线发表了中科院上海巴斯德研究所李斌课题组的一项研究成果，研究人员在题为《炎症条件下PIM1激酶通过特异性促进转录因子FOXP3 Serine 422位点的磷酸化负向调控其转录调节活性》的研究论文，揭示了炎症条件下调节性T细胞（Treg）功能稳定性负调

Science杂志最受关注的文章（11月）

生物通报道：美国的《Science》杂志由爱迪生投资创办，是国际上著名的自然科学综合类学术期刊，与英国的《Nature》杂志被誉为世界上两大自然科学顶级杂志。Science杂志主要发表原始性科学成果、新闻和评论，许多世界上重要的科学报道都是首先出现在Science杂志上的，比如艾滋病与人类免疫缺

蛋白质组学的标准化(上) Tim Wehr 由于人类基因序列的建立已经接近完成，人们认识到生物科学届的下一项任务将是表征基因组的产物——其中绝大部分是蛋白质。作为正在兴起的研究领域，蛋白质组学将其研究目标定位于：鉴定和测量在一个细胞或组织中的所有蛋白质，这样做的预期是，将能发现那些能够成为疾病生物标志物(bioma

脂肪酸代谢概述（二）

(一)软脂酸的生成 脂肪酸的合成首先由乙酰CoA开始合成，产物是十六碳的饱和脂肪酸即软酯酸(palmitoleic acid)。 1.乙酰CoA的转移 乙酰CoA可由糖氧化分解或由脂肪酸、酮体和蛋白分解生成，生成乙酰CoA的反应均发生在线粒体中，而脂肪酸的合成部位是胞浆，因此乙酰

寡核苷酸指导的单链 DNA 诱变实验

本文介绍了由 Zoller 和 Smith 的双引物技术（1984,1987) 结合 Kunkel 的诱变体产量富集方法（1985) 构成的经典方案。本方案中使用的单链 DNA 模板含有较高的尿嘧啶残基，因为它们是从生长于 dut 和 ung 基因突变大肠菌中的 M13 噬菌体中制备的（见方案 1)

着丝粒功能建立与维持的关键因子CENP-A的装配机制被揭示

中科院生物物理所李国红课题组最近在著名期刊Developmental Cell上在线发表了题为“Dynamic Phosphorylation of CENP-A at Ser68 Orchestrates Its Cell-Cycle-Dependent Deposition at Centr

第十二届全国分析化学年会大会报告集锦（一） 2015年5月8日-11日，第十二届全国分析化学年会在美丽的武汉洪山大礼堂举办，本次会议由中国化学会和国家自然科学基金委主办、华中师范大学承办，会议每三年一次，旨在交流与探讨分析化学学科的新成就、新进展和新技术。本次会议吸引到分析化学领域的院士、专家、学者2000余人。 5

安捷伦Seahorse技术助力监测白血病氧化磷酸化阻断过程

安捷伦细胞分析网络研讨会3月7日“使用安捷伦Seahorse技术监测白血病中氧化磷酸化阻断引起的代谢重编程”，欢迎注册参加。 白血病是人体造血组织包括骨髓（急性髓性白血病-AML）和淋巴系统（急性淋巴性白血病-ALL）产生的癌症。从代谢角度来看，获得性药物抗性与细胞趋向氧化磷酸化依赖性高能状态

蛋白质糖基化修饰在生命体中的作用

治疗性重组蛋白或单克隆抗体是影响细胞、组织、器官乃至生命的外源性重组蛋白，在细胞内成熟过程中几乎均会发生蛋白质糖基化修饰，而糖基化修饰的质和量的差异，可能会影响相关重组蛋白表达水平、结构及功能。重组蛋白表达服务可以帮助研发人员研发高效、高质量的蛋白质。在生物体中50%以上的蛋白质存在糖基化现象，

预防瑞芬太尼诱发术后痛觉过敏的处理措施

瑞芬太尼是一种选择性、超短效阿片受体激动剂，因其独特的脂性结构使其通过血液和组织中的非特异性酯酶快速水解，终末清除半衰期小于10 min。由于瑞芬太尼生物转化非常快速、完全，因此，其输注时间长短基本对苏醒时间无影响。不论输注时间长短和剂量多少，其时量相关半衰期大约3 min，且不易蓄积。肝肾功能

第七届全国微全分析系统学术会议隆重召开

2012年4月24日，由国家自然科学基金委、中国化学会分析化学委员会主办，浙江大学微分析系统研究所承办的2012年微纳尺度分离分析技术学术会议、第七届全国微全分析系统学术会议在浙江大学紫金港校区国际会议中心隆重召开。来自全国高等院校、科研机构、企事业单位的300余名专家学者出席了本次会议。第七届

微生物所揭示免疫细胞恶性转化机制

一些病毒感染可以直接诱导细胞癌变，例如小鼠白血病病毒（A-MuLV）感染可以使小鼠前B淋巴细胞发生癌变，进而导致小鼠白血病的发生，这类白血病与人类的Bcr-Abl阳性白血病的发生过程极为相似。因此，小鼠白血病病毒诱导免疫细胞癌变为研究人类白血病提供了良好的动物模型。中国科学院微生物研究所研究员陈

蛋白翻译后修饰的基金申请解析与研究注意点（二）

由此可见，泛素化相关基金无论是申请项目数还是金额数均在向磷酸化逼近，甚至从重点项目数看，18年泛素化的项目数已然超过了磷酸化。进一步统计表明，泛素化研究资助项目在医学部中一共98项，总资助金额高达4700万元。由此可见，泛素化的相关研究正是科研界的“当红小生”，基金申请的一大热点。图2.国自然基金项

糖酵解途径

糖的无氧酵解途径——糖酵解途径 是在无氧情况下，葡萄糖分解生成乳酸的过程。它是体内糖代谢最重要的途径。 糖酵解途径包括三个阶段： 第一：引发阶段。葡萄糖的磷酸化、异构化。 已糖激酶(催化)

华东师范大学博导连发两篇Molecular Cell文章

来自华东师范大学生命医学研究所，上海市调控生物学重点实验室等处的研究人员发表了题为“A Methylation-Phosphorylation Switch Determines Sox2 Stability and Function in ESC Maintenance or Differen

引物合成相关问题25答

1. 引物是如何合成的？ 目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产，而Bioneer自行研制的专利384并行高通量DNA合成仪，可实现99%的高合成率。无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和

中国科学院大连化学物理研究所 张玉奎院士 2014年4月26日，首届全国质谱分析学术研讨会在北京西郊宾馆盛大开幕。来自中国科学院大连化学物理研究所的张玉奎院士为大家带来题为《蛋白质组定量新技术新方法研究》的报告。

PE将生物化学蛋白激酶检测项目扩展到 310 项

检测技术的全球领导者针对新药研发中综合蛋白激酶分析增加多个产品 芝加哥，2009 年 10 月 19 日(美国商业新闻)- 专注于提高人类健康及其生存环境安全的全球领先公司 PerkinElmer, Inc.，宣布业内用于蛋白质激酶活性检测和分析的最全面的试剂产品系列已经得到扩充，目前该产品线