相关文章
- 其林贝尔微型台式真空泵 GL802B 价格 厂价直销其林贝尔...
- siRNA讲座PPT_图文
- Leica DFC345 FX,高速数码摄象机,Leica ...
- 德国美诺Miele:洗瓶机发明者 织物感控领航者 分析行业...
- protein extraction | Thermo Fi...
- 【日本富士消光粉】日本富士消光粉价格_日本富士消光粉批发 ....
- IPC$命令详解_weixin_33758863的博客
- ...这个实验:谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化融合蛋白实验 实...
- 转氨酶正常值
- 蛋白质分离纯化的新技术及技术要点样本
- 切片机有哪些厂家 切片机有哪些厂家批发厂家、厂家比价、优质...
- ...这个实验: PK120 的纯化及肽段氨基酸序列分析实验...
促销商品
最新问答
- [07-31]【求助】新手求教coIP抗体纯化的问题!谢谢!_问答详情_蛋白纯化...
- [07-27]如何全面认识蛋白纯化,Abbkine给你答案 亚科因（Abbkine）—服务...
- [08-09]【讨论】在ELISA试剂盒方面有多年经验,欢迎大家共同讨论在ELISA...
- [10-03]怎么看一个公司代测的ELISA试剂盒准不准_问答详情_蛋白纯化_...
- [10-03]问个,一抗二抗结合的问题(elisa)_二抗抗鸭_二抗_分子细胞生化试剂_...
- [10-03]Agrisera代理上海恒远生化试剂有限公司
- [07-24]什么是包被抗原?它和免疫抗原有什么区别?越详细越好! 分子生物...
- [08-12]Western blot实验方法、步骤、介绍/Western blot protocol/免疫印迹...
- [08-07]验血报告中的H和L代表什么意思_有问必答_
精选品牌
热卖商品
肌肉肌球蛋白和肌动蛋白的纯化实验一DEAE纯化肌肉肌球蛋白
蚂蚁淘
/发布时间:1631467807 /浏览量:117
| 实验材料 | 肌肉肌球蛋白 试剂、试剂盒 | 焦磷酸钠柱平衡缓冲液柱缓冲液高盐缓冲液肌球蛋白-DEAE透析缓冲液 仪器、耗材 | SDS-PAGE
实验步骤 | 一、准备DEAE柱和材料 1.准备贮存液和材料 200mmol/L焦磷酸钠（NaPPi)，pH7.0 用HCl和H3PO4调NaPPi溶液的pH值 2x柱平衡缓冲液： 40mmol/LNaPPi，pH7.0 2mmoI/LDTT 6mmol/LNaN3 2.把DE-52悬浮在15倍体积的0.5mol/LHCl中，搅拌30分钟。 3.用dH2O洗DEAE直至pH超过4.0。 4.在15倍体积的0.5mol/LNaOH中悬浮DEAE，搅拌30分钟。 5.用dH2O洗DEAE直至pH为8.0。 6.重复酸和dH2O这两步（步骤2和3)。 7.用浓缩的（2x)柱缓冲液滴定到合适的pH值。 8.用1x柱缓冲液平衡DEAE。 1x柱缓冲液： 20mmol/LNaPPi，pH7.0 1mmol/LDTT 3mmol/LNaN3 10倍体积的缓冲液换3次可能比较合适，但是平衡与否应该通过比较起始平衡缓冲液和从沉降了的柱床上取的上清的电导率和OD280值来检验。 9.用平衡了的DEAE准备一个2.5cmx60cm的柱子（用合适的管路）。 10.用合适的管路做一个1L的梯度生成器（每个杯子1L）。 (1)加大约1.05L1X柱缓冲液到梯度生成器的杯子中。 (2)通过瞬时打开阀门然后关上来赶走阀门和管路中的空气。 (3)在另一个杯子中加1L高盐缓冲液。 高盐缓冲液： 20mmol/LNaPPi，pH7.0 1mmol/LDTT 3mmol/LNaN3 其中含0.5mol/LNaCl (4)去掉多余的缓冲液使梯度生成器两边的溶液高度相等。 (5)在产生梯度前打开杯子间的阀门。 (6)从梯度生成器的低盐和高盐杯子中保留小部分样品。使用这部分样品来校正电导率测量值，这样就可以通过组分的号码或体积来知道梯度的盐浓度。 二、用柱层析来纯化肌球蛋白 1.取60mg用前面的方法获得的肌肉肌球蛋白在肌球蛋白-DEAE透析缓冲液中透析。 肌球蛋白-DEAE透析缓冲液： 40mmol/LNaPPi，pH7.0 1mmol/LDTT 3mmol/LNaN3 2.在以上述方法准备的2.5cmx50cmDEAE柱上加60mg肌球蛋白（5mg/ml）。 3.流速调整为0.5ml/分钟并立即开始收集组分（穿过峰)。 4.用1x柱平衡缓冲液洗柱子直到洗脱液的OD值和平衡缓冲液的相同（3~5个柱体积）。 5.用平衡缓冲液以0~0.5moI/LNaCI线性梯度洗脱肌球蛋白（2L总体积，如上面步骤10所述配制），收集10~20ml组分。 6.用2~3倍体积的高盐（柱平衡缓冲液中含1mol/LKCl）洗柱子来洗脱所有残余的结合蛋白。 7.检测组分的电导率，蛋白浓度，并通过SDS-PAGE检测多肽组成。
================ 蚂蚁淘在线 ================ 免责声明：本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容 版权声明：未经蚂蚁淘在线授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘在线”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。 相关阅读
|
|---|
