重组杆状病毒的纯化实验一编码β半乳糖苷酶相关交流-蚂蚁淘在线

重组杆状病毒的纯化实验一编码β半乳糖苷酶

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实验材料	杆状病毒
试剂、试剂盒	琼脂牛血清
仪器、耗材	培养瓶冻存管
实验步骤	1. 制备病毒上清的系列稀释液，该病毒上清获得自在无血清完全培养液中转染pAC360β-galDNA的细胞。在含150μg/mlX-gal 的琼脂糖顶层覆盖物下病毒形成蚀斑。 2. 当蚀斑形成后，用灭菌巴斯德吸管挑取一个分离较好的蓝色蚀斑，并将琼脂糖块移入一支含有1ml无血清完全培养液的无菌试管中。在旋涡混合器上剧烈篱荡，并用无血清完全培养液制备10^-1、10^-2和10^-3的系列稀释液。 3. 用含150μg/mlX-gal 的琼脂糖顶层覆盖物蚀斑测定病毒（有助于发现重组子），重复蚀斑试验，直到获得纯的重组病毒贮液。 4. 用无菌吸管挑取一个纯的重组蚀斑，将琼脂糖块移入一含2.5×10⁶Sf9细胞和5ml完全培养液（含10%胎牛血清）的25cm²培养瓶中。于27℃温育4~5天直到大多数细胞被感染。 5. 确定病毒滴度（应在5×10⁷~1×10⁸ pfu/ml之间）。 6. 加入1ml该毒种贮液于一支1.5ml螺口冻存管中，于-80℃可长期保存，于4℃保存剩余的液体（标记为初代毒种液）。从初代毒种液中生产大批病毒贮液并滴定之。