抗体纯化还有其他方法。最著名的是分子筛层析法（sizeexclusionchromatography,SEC)及离子交换层析法（ionexchangechromatography，IEC)。对于IEC，有许多阴离子交换树脂，它们作用于单克隆抗体的效果要好于多克隆抗体，因为想要纯化出最局产量的抗体就需要知道抗体的等电点（isoelectricpoint,pi)。很明显，多克隆抗体的pI范围宽,而单克隆抗体的pi范围较窄。下面的图表显示了各种单克隆抗体亚型在使用阳离子或者阴离子交换柱纯化时，其洗脱峰时的NaCl摩尔浓度范围（图7.4)。



由于多克隆抗体Pl范围较宽，所以用某一特定的PH缓冲液及离子强度洗脱时，不是血清中的所有抗体都能与基质保持结合。因此，最好采用梯度洗脱体系。可对血清中洗脱的免疫球蛋白进行选择，并可将不同条件洗脱的抗体加到一起。对于某些多克隆抗体，其他血清蛋白可能在相同的条件下与其一同洗脱。IEC的主要优点是成本低。不论是阳离子还是阴离子交换树脂其费用均比蛋白质A和蛋白质G低。但与蛋白质A和蛋白质G相比，这种方法纯化结果变异很大，并且纯化条件需依据每种抗体而确定。纯度范围为60%〜95%。
IEC的最大的优点是它能精制备其他方法纯化的单克隆抗体。IEC将分离去除单克隆抗体中的蛋白质A或蛋白质G、DNA、逆转录病毒及内毒素。所得的单克隆抗体纯度可被认为>99%,这对制备用于动物实验和临床试验的单克隆抗体具有很大价值。
SEC是蛋白质纯化中最古老的技术之一，同时也是一种温和的方法，因为可用生理条件下的缓冲液将抗体在最适pH中进行纯化。一些制造商生产多种树脂。对于抗体，葡聚糖凝胶（Sephadex）G150、G200、G300（Pharmacia/Pfizer）是常用的树脂。数值体现在颗粒的孔径度上，数值越高，表明孔径越大。大分子不进入胶孔内先流出，因此它穿过柱子的速度要比小分子快。小分子在流经孔径时因被阻止而进人基质所以比大分子后洗脱下来。
经过蛋白质A/G纯化后，可能会有一些脱落的蛋白质A/G、细胞来源的DNA、小的抗体片段及大的蛋白质聚集体。在蛋白质A/G纯化后，可用SEC去除抗体制品中的这
些少量成分，使得其浓度几乎>99%。SEC也可以作为分析抗体制品纯度的一种廉价手
段。在一个小柱子中加入少量的浓缩抗体就能够以色谱方式显示抗体的纯度和杂质的分子大小，所得结果与高效液相相近。
依据所准备的SEC柱种类不同，柱子的最大上样量与柱宽和柱高有一个最低限度的绝对相关性。参照下图计算柱子直径（图7.5)。


除非柱子的直径达2m①以上并且柱高达几英尺，否则不能以大样本上样。依我们的经验，上柱的抗体体积为整个柱容量的5%。在大多数情况下，一次只能纯化几毫克的
量。因此大量抗体的纯化是一个冗长复杂的过程。尽管如此，SEC仍是增加抗体产品纯度的有价值的方法，并且也是分析最终的抗体纯度的廉价途径。