相关文章
- Purification Histagged protein...
- 蛋白质的一级结构及分析
- 谁在做这个实验:固相化金属亲和层析法纯化蛋白质实验 实验方...
- 重组子筛选的原理和实验方法
- bEnd.3细胞培养基
- [CSC2017]许予明：缺血性脑卒中复发预后的评估_缺血性...
- 澄清液,固定液，浸没液 上海 其他仪器/试剂食品商务网 .....
- Re：【提供】PGL3全套,PRLTK,PRLCMV 质粒
- 【动物检测毕特博】 MoBiTec品牌的载体表达系统的产品价...
- 反射式共聚焦显微镜使诊断更为简便:诊断黑色素瘤和非黑色素瘤皮...
- 核酸亲和层析法纯化蛋白质实验1
- 以二酮酸酯作为锌离子结合基团的组蛋白去乙酰化酶抑制剂药学.....
促销商品
最新问答
- [10-03]试剂盒的分类和特点
- [08-09]【讨论】在ELISA试剂盒方面有多年经验,欢迎大家共同讨论在ELISA...
- [07-26]纯化抗体
- [10-03]双抗夹心法制备Elisa试剂盒时。怎么确定包被用抗体浓度?
- [07-30]GST标签融合蛋白纯化试剂盒
- [08-07]验血报告中的H和L代表什么意思_有问必答_
- [08-02]免疫组化二抗应该如何选择?_抗体
- [07-31]【求助】新手求教coIP抗体纯化的问题!谢谢!_问答详情_蛋白纯化...
- [08-10]如何选择合适的流式抗体(五)优宁维(univ)官网
精选品牌
热卖商品
非肌肉肌动蛋白的纯化实验一非肌肉肌动蛋白的纯化
蚂蚁淘
/发布时间:1632072607 /浏览量:94
================ 蚂蚁淘在线 ================
免责声明：本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容
版权声明：未经蚂蚁淘在线授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘在线”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。
相关阅读
-
资质认证
获得国家资质，权威认证！
-
全国联保
全国联保，官方无忧售后
-
正规发票
正规发票，放心购买
-
签订合同
签订合同，保障您的权益
| 实验材料 | 非肌肉肌动蛋白 |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | DNA酶Ⅰ缓冲液 |
| 仪器、耗材 | DEAE柱 |
| 实验步骤 | 1.准备贮存液和材料。 2xDNA酶Ⅰ缓冲液： 20mmol/LTris-HCl，pH8.0 1mmol/LDTT 0.4mmol/LCaCI2 0.4mmol/LATP 抑蛋白酶肽 抑蛋白酶 亮抑蛋白酶肽 抑胃酶肽A PMSF TPCK 50%甲醛在DNA酶柱缓冲液中 0.4mol/LNH4CI在DNA酶Ⅰ缓冲液中 0.3mol/LKCl在DNA酶Ⅰ缓冲液中 DNA酶Ⅰ柱缓冲液 2.准备一个5~10ml的DNA酶Ⅰ的亲和柱。 3.准备一个0.2~1ml的DEAE柱：用DNA酶Ⅰ缓冲液平衡的DEAE-纤维素。 4.通过离心收集细胞并用等渗盐溶液（例如PBS)洗去培养液。 5.在加蛋白酶抑制剂的DNA酶柱缓冲液中重悬细胞沉淀物。 6.用对于感兴趣细胞的标准方法进行细胞匀浆。 7.用相差显微镜证实超过99%的细胞已经裂解了。 8.100000g离心裂解物45分钟。 9.用巴斯德吸管转移上清，避免混入脂肪。 10.柱子上样： (1)上清和用DNA酶Ⅰ缓冲液加蛋白酶抑制剂平衡了的DNA酶Ⅰ亲和介质混合，并把介质/蛋白混合物倒到一个小杆子中。 (2)在装填柱子时收集流出液，通过用抗肌动蛋白抗体进行的免疫印迹、DNA酶Ⅰ抑制分析或SDS-PAGE来证实有大量肌动蛋白留在柱子中。 11.用2倍体积含蛋白酶抑制剂的DNA酶柱缓冲液洗柱子，然后用含蛋白酶抑制剂和0.4mol/LNH4Cl的DNA酶柱缓冲液洗柱子。 12.用含50%甲醛的DNA酶Ⅰ柱缓冲液洗脱肌动蛋白。 13.立即把50%甲醛洗脱液上样到0.2~1mlDEAE柱子上。 14.用5倍体积的DNA酶Ⅰ柱缓冲液洗DEAE柱，然后用含0.3mol/LKCl的DNA酶Ⅰ柱缓冲液洗脱。分部收集，每管200μl。 15.检测收集液的蛋白浓度，然后混合出峰时的收集液。 16.加MgCl2使浓度为2mmol/L(这是选用于天然肌动蛋白），以使肌动蛋白聚合，用SDS-PAGE分析多肽组成。 产量应该是5%左右，所以从湿重10g的细胞指望得到2.5~5mg纯化了的肌动蛋白是合理的。 |