1. 取2ml的弗氏完全佐剂加到2ml的溶于PBS的纯化抗原中，使之乳化。用3ml注射器抽取此乳化液，接上22G注射针头，排出注射器中的气泡。

 

2. 将兔子敢在固定架上，用一只手抓住兔的颈背部毛皮，另一只手托住兔的后腿及臀部，将兔束紧固定以使后肢不能伸张，用70%乙醇对所要注射的区域进行清洁消毒，在后肢大腿肌肉内进针约1cm深，毎条大腿肌肉内最多注射0.5ml乳化液。

 

3. 四周后，用1mg的混溶干弗氏不完全佐剂的抗原乳化液（1：1）对兔进行肌肉内加强免疫注射，操作步骤同1和2，初次加强免疫后2周再次进行加強免疫注射。

4. 第二次加强免疫注射10天后，从兔的耳缘静脉处放血。

（1）先将兔固定在固定架上（固定紧），使其耳朵伸出，用70%乙醇洗洁消毒一侧耳朵。

（2）将兔耳置于热灯之下，用手指轻轻地拍打兔耳；1~2min内兔耳上的血管即会充分地充盈。

（3）用一消毒过的解剖刀的锋尖在兔耳缘静脉上迅速划一长约0.5cm的小口，收集兔血于50ml的塑料离心管中，直至伤口不再流血为止。

（4）使兔血顺管壁下落，以避免发生溶血。