一、材料

小鼠：经Pristane预刺激的4只雌性老年BALB/c小鼠

PristaneCSigmaT-7640)

Tuberculin注射器（Iml)

无菌针头（21号）

无菌针头（30号）

氢化可的松琥拍酸醋（hydrocortisone21-hemisuccinate，SigmaH4881)，6mg/ml溶于无菌D-PBS中

杂交瘤细胞，5X10⁶个细胞/只小鼠

0.4%的台酚蓝染液（SigmaT8154)

无菌尖底离心管（15ml或50ml)

无菌D-PBS

二、设备

血球计数板

光学相差显微镜

台式离心机

铯同位素y射线照射器

三、时间需求

用Pristane预刺激4只小鼠需lOmin。准备和注射氢化可的松琥珀酸酷需45min，7射线照射4只小鼠需lOmin。杂交瘤细胞需提前培养：注射用细胞的准备大约需要30min，细胞注射大约需用lOmin。

四、步骤

1.杂交瘤细胞注射前Ud用Pristane预刺激小鼠(见「小鼠的预刺激和杂交瘤细胞的注射」）。

2.杂父瘤细胞注射則二天，用装有30号针头的ImlTuberculin注射器在每只小鼠一条腿的臀部肌肉上注射0.5ml的氢化可的松琥珀酸酯。

3.杂交瘤细胞注射前2d，用550rad①亚致死剂量的7射线照射小鼠。

4.准备和注射杂交瘤细胞及收获腹水的步骤见「小鼠的预刺激和杂交瘤细胞的注射」和「腹水采集」。

五、结果

通常杂交瘤细胞在同种异型小鼠中的生长速度较同基因杂交瘤细胞在BALB/c小鼠中的生长速度要慢得多，即使同种异型小鼠是处理后为免疫缺陷或免疫抑制的。因此，腹水形成更加缓慢。通常小鼠在注射杂交瘤细胞后10〜14d就可准备第一次收获腹水(穿刺放液），但如果30d后仍无腹水产生，则表明操作失败。
从每只小鼠收获的腹水体积范围可能达到2〜IOmU腹水中单克隆抗体的含量范围为1〜10mg/ml，即4只免疫抑制型小鼠可能产生10〜20mL腹水，含10〜200mg抗体。各杂交瘤细胞系间和相同杂交瘤细胞系的各批次间腹水的产量会有变动。