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小鼠胚成纤维细胞的培养和体外分化一MEF滋养板的制备
实验材料 | 丝裂霉素C 试剂、试剂盒 | 胰酶溶液PBS明胶溶液 仪器、耗材 | MEF生长培养基组织培养皿
实验步骤 | 1.准备下列材料 MEF生长培养基 胰酶溶液 无Ca2+和Mg2+PBS 丝裂霉素C 明胶溶液(0.1%) 150mm组织培养皿 滋养细胞组织培养皿 2.准备一支15ml离心管,加5ml预热(37℃)MEF生长培养基。取一支液氮冻存的MEF细胞,37℃水浴中轻轻振荡,细胞融化后转移到离心管中。 3.离心收集细胞,悬于10mlMEF生长培养基,接种150mm组织培养皿,加MEF生长培养基至25ml。37℃孵育至细胞长满(约2~3天)。 4.细胞长满后加入丝裂霉素C。吸掉培养基,加入新配制的含丝裂霉素C(10μg/ml)的MEF生长培养基。37℃孵育2.5小时。 5.孵育同时准备明胶处理的滋养细胞培养皿。 (1)0.1%明胶溶液覆盖空的组织培养皿底,室温保温15分钟。 (2)倒掉明胶溶液,培养皿晾干,平放待用。 6.去掉培养基,10mlPBS冲洗三次,完全去除丝裂霉素C,加10ml胰酶溶液,37℃孵育5分钟。 7.加3mlMEF生长培养基,吹吸分散细胞,转移至15ml离心管。 8.离心收集细胞,悬于10mlMEF生长培养基,计数细胞。 9.丝裂霉素处理的MEF细胞以合适密度接种明胶包被培养皿。
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