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大鼠神经元细胞的分离和培养实验一解离神经元培养物的制备
蚂蚁淘
/发布时间:1533259712 /浏览量:71
| 实验材料 | 母鼠 试剂、试剂盒 | BSS 仪器、耗材 | 无菌器械显微镜
实验步骤 | 1.杀死怀孕18天母鼠（常用过量CO2使其窒息），用无菌器械取出胚胎，放在无菌的培养皿中。 2.取下胚胎的头，放在盛有4ml不含Ca2+和Mg2+的平衡盐溶液（BSS）的培养皿中。 3.从头颅骨上取下脑，放在35mm培养皿中的BSS液滴上，培养皿中半装满Paraplast（Sigma）。 4.在显微镜下剥离脑膜，取下海马体，放在装有BSS的35mm培养皿中。 5.海马体在新鲜配制的0.25%胰酶BSS溶液中37℃孵育15分钟。 6.小心吸掉胰酶溶液，加入5mlBSS，层流柜中室温放置5分钟。重复此步两次或更多次，最后加入2mlBSS。 7.首先用普通巴斯德吸管分离细胞，然后换用一支用火烧平尖端、内径缩小一半的吸管。 8.计数细胞，确定细胞密度。 9.所需数目的细胞悬浮于接种培养基中，接种培养皿中poly-L-lysine预处理的盖玻片。如果用于生化实验，细胞直接接种poly-L-lysine处理的培养皿。 10.2~4小时后，盖玻片转移至含有单层神经胶质的培养皿中，培养皿中是维持培养基。 11.每周更换3ml培养液。
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