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哺乳动物组织的匀浆实验一附加方案：从组织匀浆液中去除黏蛋白
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/发布时间:1533259753 /浏览量:156
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| 实验方法原理 | 黏蛋白存在于大多数生物提取物（如黏膜）中，这使蛋白的纯化工作更为复杂，因为黏蛋白会结合在层析填料上*从而引起层析柱的堵塞。用本方案可以从组织匀浆液中选择性地除去黏蛋白，这一方案是为了分离和定性研究结肠黏膜的新生长因子而建立起来的。 |
|---|---|
| 实验材料 | 动物组织 |
| 试剂、试剂盒 | 碳酸铵缓冲液PMSF |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1将从结肠上刮下来的黏膜放人5倍体积的碳酸盐缓冲液（pH9.2，含抑胃肽酶和PMSF)中，使用Ultra-Turrex匀浆器匀浆。 ②10000g离心20min，除去组织碎片。 ③逐滴加入lmol/LHCl(约需100ml),缓慢（大于2h)调上清液的PH值至4.5，并不断搅动。使黏蛋白形成絮状沉淀。 ④4℃:条件下10000g离心20min，以除去沉淀。上清液为粗提液，可以作为纯化方案的原始材料。 |
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