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实验材料 | DNA |
---|---|
试剂、试剂盒 | dNTP生物素klenow酶TEEDTALiCl乙醇 |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 在1.5ml离心管中加入500ng~2μg模板DNA,加水至总体积为34μl。 2. 在沸水中变性DNA5min置于冰浴5min,稍加旋离。 3. 按顺序加入下列溶液: (1)10μl 生物素酰化随即多聚体 (2)5μl dNTP/生物素混合物 (3)1μl klenow酶(5U) (4)37℃温育1h。 4. 加入3μl0.5mol/lEDTApH8.0以终止反应。加入5μl4mol/lLiCl和150μl 冰冷的无水乙醇,置于冰浴30min。 5. 室温高速离心10min,沉淀用70%乙醇洗涤。 6. DNA用20μlpH7.5的TE缓冲液重悬。用比色法或化学发光法估价生物素酰化反应的效果。 |
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