microRNA

过表达载体具体使用说明及步骤

MicroRNA

（

miRNA

）是一类真核生物内源性

的小分子单链

RNA

，通常长为

18~25nt

，

能够通过

与靶

mRNA

特异性的碱基配对结合，

引起靶序列降

解或抑

制其翻译，从而对基因进行转录后的表达调

控（如右图所示）

。

GenePharma

MicroRNA

载体

利用

CMV

启动子可以在众多哺乳动物细胞中快速、

高效、

持

续表达

pre-miRNA

，

经过

Drosha

（

RNaseⅢ

）

作用形成

smallhairpinpre-miRNAs

。

在使用载体法针对某一

MicroRNA

进行过表达研究过程中，通常会遇到

如下几个问题：实验对照组的确立、细胞转染条件的确定、基因表

达效率的检

测。

1

、

实验对照组的确立

在一个完善的

MicroRNA

表达实验设计中，

必须

考虑设立正确合理的实验对照组。通常，这些对照组包括载体阴性对

照组、转染试剂

对照组。

载体阴性对照可以有两种，一种是采用通

用

的

阴

性

对

照

组

，

在

本

试

剂

盒

中

包

括

了

该

对

照

所

需

的

载

体

（

microRNA

）

，可以表达与目的基

因序列无同源性的

microRNA

片

段；另一种是将目的

microRNA

的序列打乱后重新组合所得的阴性

对照（

scrambled

）

。

对照组的设立对于

MicroRNA

表达研究是很有

必要的，您可以利用载体对照来确认

microRNA

实验中转染、

RNA

提取和基因表达检

测方法的可靠性。

2

、

细胞转染条件的确定

使用

MicroRNA

载体转染细胞时，为了选择合适的转染方法和确定

转染效率，

通常采用报告基因来检测

DNA

的导入情况。

最常用的

报

告基因是绿色荧光蛋白。